慢病毒感染攻略

慢病毒感染注意事项
1. 进行病毒操作时最好使用专用生物安全柜，避免污染。
3. 在转染后，如果目的细胞系GFP荧光强度弱，可观察293T平行对照组荧光强度，如果293T荧光强度也弱，需要考虑病毒液本身的问题，如果293T荧光强度正常，就需要考虑是不是目的细胞系属于难转染细胞系等其他原因。
4.在转染过程中常常遇到加入病毒液后或者加入Puromycin筛选后细胞状态极差的情况，这个时候细胞通常比较脆弱，在已经确定好病毒液的量或者Puromycin筛选浓度时，多考虑是不是在转染时细胞本身状态不够好（比如传多代的细胞会难转染的情况）。
5.如果加Puromycin后细胞死亡较多，需要及时换液，以防死细胞释放的有害物质影响具有抗性的细胞生长。
6.像HepG2细胞具有聚集生长的特性，如果加Puromycin后死亡的细胞较多，剩下的HepG2细胞比较稀松，细胞也很难长起来。

特殊细胞的感染注意事项
1、悬浮细胞
感染悬浮或半悬浮细胞，建议通过平角离心转染法，先重悬细胞，然后将适量的病毒液加入细胞培养皿后， 封好口，放入平角离心机，低速（1200g）离心1 h，然后放入培养箱中正常培养即可。若由于实验条件有限，没有平角离心机，可用离心管代替，将细胞吹打吸入离心管中，进行低速离心，去掉大部分上清，然后加入适量的病毒液，室温放置15 min（尽量不要超过30 min），然后将细胞和病毒液同时吸出转入培养皿中继续病毒感染过夜即可。

2、极难感染的细胞
对于极难感染的细胞，如DC（树突状细胞）等，可采用多次感染的方法，即感染24 h后，更换新鲜病毒进行二次感染，可显著提升感染效率。
注：多次感染的时间间隔需要根据细胞状态来调整，要保证每次感染前细胞处于较良好状态。

3、传代能力较差的原代细胞
对于一些传代能力较差的原代细胞，比如BMSC等，建议采用滴度更高的腺病毒进行感染。