体外培养细胞工作中支原体污染怎么办

细胞体外培养过程中， 常见的污染包括细菌污染、霉菌 污染及支原体污染， 还有细胞间的交叉污染。细菌和霉菌污染在显微镜下甚至是肉眼就很容易识别。细菌污染时， 培养瓶中的培养液变酸、变浑浊， 显微镜下， 细胞间大量活跃运动的细小颗粒， 细胞大量死亡。 霉菌污染时， 严重时可见霉菌团块， 漂浮在培养液中， 显微镜下可见不同形态的霉菌菌丝。只有支原体污染， 较难识别。常常对培养细胞的支原体的污染估计不足或被忽略。

支原体污染的潜在途径包括：

1、受污染的培养基、试剂或仪器

2、实验室人员（约 80.6 %的技术人员为支原体携带者）

3、其他实验室的被感染培养物

支原体的污染来源

（1）细胞之间交叉污染；

（2）细胞培养操作人员的口腔、皮肤等；

（3）工作环境或实验器材的污染；

（4）培养基的污染。

支原体检测的方法主要有培养法、荧光法、电子显微镜法和聚合酶链反应( PCR) 法。美国食品和药品管理局( FDA) 及欧洲要求必须进行培 养法及利用指示细胞进行的 DNA 荧光法的检测。 这两种方 法特异性和敏感性都很好， 但实验周期太长。 抗体荧光法准 确性不够。 PCR 法以其准确、快速及操作方便， 作为筛选方 法已被越来越多的实验室使用， 培养法可作为后备。

在科学研究和开发研究中， 避免支原体污染及减少支原 体污染对科研、开发工作影响的最好方法就是定期对培养的 细胞进行支原体检测 。 这种常规支原体检测可最大限度降 低支原体污染， 确保排除未知支原体与细胞相互作用而产生 的严重后果。 尤其是在研究领域， 常忽视培养细胞中支原体 的污染， 或对支原体污染程度估计不足。 迫切需要提高认 识， 加强对培养细胞支原体污染的检测。

在日常细胞培养工作中可采用以下几点来控制支原体 的污染问题：

1 .从可靠来源引进、使用细胞， 特别是知名的信誉良好 的专门机构， 如 ATCC 、基础医学细胞中心等， 这些机构对细 胞质量进行一系列检测。

2 .预防为主：细胞培养实验室应制定严格的管理制度， 按照规范的实验程序操作。 特别提醒一般实验室可从戴口 罩、帽子做起。

3 .定期对实验室中的培养物进行支原体检测。 这也是 国外一些重要实验室的经验。 一旦发现已经污染支原体的 培养物， 灭活后弃之。 更换新的培养物。 避免支原体的进一 步播散。

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