开机

1. 鞘液桶，废液桶。鞘液桶：断气路线→上提排气阀→开盖→加鞘液10 min→关盖→连气路线&鞘液线；废液桶：断废液线&废液感应线→开盖→倒掉废液30 min消毒→关盖→连废液线和废液感应线

2. 开稳压器。

3. 开流式细胞仪

4. 开电脑。账号：Admin；密码：BDIS#1

5. 开软件FACSDiva。直接OK。

6. 排气。1）外部鞘液管路排气：①按住接头顶部，鞘液过滤器排气（直至无气泡），需要接液体。②放开滚动滑轮（仪器右后方），鞘液管路排气（直至无气泡），锁紧滚动滑轮（无液体流出），需要接收液体。2）内部鞘液管路排气：①流式管支撑臂放旁边，取下有蒸馏水的流式管。②按PRIME排气。③排气完，STANDBY自动亮（即待机），流式管放回去，支撑臂放正。

7. 质控（开机十分钟后质控）

关机

1. 洗。1）清洗进样针外管：支撑臂放一旁，进样针放一管3 mL Clean液，吸入1 mL后再把支撑臂放正。2）清洗进样针及仪器管路：HI & RUN，高速运行5-10 min。

2. Clean液换成Rinse液，重复前面操作。

3. 蒸馏水洗。1）重复前面操作。2）1 mL蒸馏水的流式管放在支撑臂上，正位。选STANDBY（即待机）。

4. 关闭FACSDiva软件和电脑。File点Quit→关电脑电源

5. 关流式细胞仪和稳压器

6. 拉鞘液桶放气阀，排气

流式实验所需设备和试剂

离心机；移液枪；涡旋混匀器；300目筛网；流式管；5 mL试管架；PBS溶液和蒸馏水：0.22 μm过膜；Clean清洗液；多聚甲醛

双色淋巴细胞亚群试验的获取和分析

样品制备：100 μL抗凝全血加到管底（不碰壁）→20 μL 荧光素标记的抗体，混匀→室温避光孵育15-30 min→10倍稀释的红细胞裂解液2 mL，混匀→室温避光10 min→300g离心5 min，去掉上清液→+2 mL PBS混匀，离心去上清→0.5 mLPBS混匀，4℃避光，1h内上机检测；不及时上机要加0.5 mL 2%多聚甲醛，4℃保存，48 h内检测

【注意事项】1.一次性倒掉上清液；2.2-8℃保存抗体。避光。

上机检测

Browser里点建文件夹，实验，样本，管（重命名）→Inspector里选中管，点Cytometer的Parameters，删除不要的荧光参数→散射光参数（FSC，SSC）选线性，荧光参数选对数，参数均选A面积信号（A默认勾选，如果需要去黏连，FSC和SSC还需勾选H和W）→Global/work sheet1画两图（①FSC-A，SSC-A，不规则P1；②FITC-A，PE-A，象限门→选中象限门，右键Show population选P1→右键选Show populaion hierarchy（显示各个百分比）→右键选Creat  statistics view