DSP，Lomant 试剂

DSP（Lomant 试剂）是水不溶性、同型双功能 N-羟基琥珀酰亚胺酯（NHS 酯）交联剂，具有硫醇可切割性、伯胺反应性，适用于多种应用。DSP 在8个碳原子间隔臂的每端有一个胺反应性 NHS 酯。NHS 酯在 pH 值 7–9 的条件下与伯胺反应可形成稳定的酰胺键，并释放 N-羟基琥珀酰亚胺。蛋白（包括抗体）通常在赖氨酸 (K) 残基的侧链和每个多肽的 N 端有若干伯胺，这些伯胺可用作 NHS 酯交联试剂的靶标。DSP 是非磺化的且不溶解在水中，因此必须首先溶解在有机溶剂中，然后再添加到水反应混合物中。由于 DSP 不具有带电的基团，它具有亲脂性和膜可穿透性，因此可用于细胞内和膜内偶联。DSP (DTTSP) 的磺化类似物具有水溶性。如果相关的应用需要一个在还原剂条件下不能裂解的稳定间隔臂，也可使用 DSP 交联剂的不可切割类似物 DSS。

图1.DSP结构式

DSP 在8个碳原子间隔臂的每端有一个胺反应性 N-羟基琥珀酰亚胺 (NHS) 酯。NHS 酯在 pH 值 7-9 的条件下与伯胺反应可形成稳定的酰胺键，同时释放 N-羟基琥珀酰亚胺离去基团。蛋白（包括抗体）通常在赖氨酸 (K) 残基的侧链和每个多肽的 N 端有若干伯胺，这些伯胺可用作 NHS 酯交联试剂的靶标。如果相关的应用需要一个在还原剂条件下不能裂解的稳定间隔臂，也可使用 DSP 交联剂的不可切割类似物 DSS。

Lomant 试剂的特点：
•反应性基团：NHS 酯（两端）
• 可与以下基团发生反应：氨基基团（伯胺）
• 胺反应性 NHS 酯与任何含伯胺分子迅速反应
• pH 值为8.5时，间隔臂中的二硫键易被 10-50 mM DTT 或 TCEP 切割
• 间隔臂也可被还原 SDS-PAGE 上样缓冲液切割
• 可切割交联剂能够分离交联产物
• 不溶于水（首先溶于 DMF 或 DMSO）；与 DTSSP (Sulfo-DSP) 具有可比性
• 可穿透膜，可用于细胞内交联

应用：
• 细胞裂解和免疫沉淀前细胞内蛋白的化学交联
• “固定”蛋白相互作用，以便识别较弱或瞬时蛋白相互作用
• 固定组织进行免疫染色而不损坏 RNA
• 进行蛋白交联，以通过单步反应产生生物偶联物
• 将蛋白固定到胺包被的表面上