不同种类的PCR探针如何工作-Scorpion® 探针

Scorpion® 探针是一种包含发夹环引物和 PCR 阻断剂的 PCR 探针。 发夹环引物在其与目标序列退火期间被修改，允许从报告器发射荧光。

Scorpion® 引物：“U”型发夹环引物，包含一个淬灭基团和一个荧光报告基团。由于这种环状结构，淬灭基团靠近荧光报告基团淬灭其荧光。它还包括与 目标序列。

PCR 阻断剂：一种己二醇 (HEG) 单体，用于在相反链的延伸过程中防止通读。

图 1. Scorpion® 探针由 PCR 阻断剂和与探针相连的 Scorpion® 引物组成。

Scorpion® 探头如何工作？

在扩增循环期间，Scorpion® 引物中的环结构被打开。 这允许内部序列与目标序列杂交，并将淬灭剂与荧光报告基因分开。

最后，这种分离让报告器发出荧光。

PCR 阻断剂位于淬灭剂的 3' 方向下游。 它用于防止在相反链的延伸过程中发生通读。 如果读取相反的链，则淬灭剂可能与报告基因分离，这将导致假荧光。

图2. 探针与序列结合，引物被延伸。 变性后，探针打开。 这导致报告基因和猝灭剂分离，然后报告基因发出荧光。

Scorpion® 探针是专为 qPCR 设计的高灵敏度、序列特异性、双标记荧光探针/引物杂交体。 与许多先进的探针一样，该探针的一个主要缺点是寡核苷酸设计复杂。