生物制药N端测序
Edman降解(埃德曼降解)法,是由菲尔•埃德曼(Pehr Edman)首先创立用于肽链或蛋白质中N-端氨基酸序列分析的方法。Edman降解法检测的原理非常简单,在碱性条件下反应,用异硫氰酸苯酯(Phenylisothiocyanate, PITC)与待检测的蛋白质(多肽)的N-端氨基生成苯氨基硫甲酰(PTC)的衍生物,然后处理-关环-选择性切断肽链N-端,得到N-端氨基酸残基的噻唑啉酮苯胺衍生物。接着用有机溶剂萃取衍生物,在酸的作用下,不稳定的衍生物转变为稳定的的乙内苯酰硫脲(PTH)衍生物,余下肽链中的酰胺键不受影响。通过用HPLC或电泳法分析生成的乙内酰苯硫脲氨基酸(PTH-氨基酸),可以鉴定出氨基酸类别。重复氨基酸鉴定反应可以达到对N端氨基酸按照从N端到C端的方向依次对氨基酸序列进行分析。对于序列较长的蛋白质(多肽),还可以将样品先切成小的肽段,先对肽段序列分析,再将肽段信息进行拼接即可获得完整蛋白质的序列信息。
