ELISA 测试原理及特点

酶免疫分析法（EIA）、酶联免疫吸附测定（ELISA）是应用最广泛的免疫测定类型。 ELISA 是一种快速测试，用于检测样品中抗原或抗体的存在和数量。

图1.Sandwich ELISA

ELISA 之所以如此命名，是因为测试技术涉及使用酶系统和免疫吸附剂。 ELISA 由与酶结合的抗体组成； 酶仍然能够催化反应，产生可见的最终产物。 术语酶联是指酶与抗体的共价结合。

使用酶作为标记有几个优点：

• 酶本身在 ELISA 过程中不会发生变化。 它可以催化许多底物分子的反应，大大放大反应，增强检测。

• 酶联抗体稳定，可以保存较长时间。

• 有色最终产物的形成允许直接观察反应或自动分光光度读数。

ELISA检测原理

大多数为检测抗原或抗体而开发的 ELISA 方法包括使用相应的抗体或抗原，这些抗体或抗原牢固地固定在固相上，例如聚乙烯板或聚苯乙烯管的塑料表面。 此类系统也称为固相免疫吸附测定 (SPIA)。 将测试样品添加到微量滴定板中，如果测试样品中存在 Ag 或 Ab，则会发生 Ag-Ab 反应（与固定化 Ab 或 Ag）。 随后将酶标抗体添加到反应混合物中，该抗体将与测试抗原或测试抗体的 Fc 部分结合。 酶系统包括：

1. 酶：辣根过氧化物酶，标记或连接到特定抗体的碱性磷酸酶。

2. 具体基材：

• 用于过氧化物酶的邻苯二胺二盐酸盐

• 磷酸对硝基苯酯 (PNPP) - 用于碱性磷酸酶

抗原抗体反应后加入底物。 该酶催化（通常水解）底物以产生颜色终点（在碱性磷酸酶的情况下为黄色化合物）。 颜色的强度与测试样品中存在的抗体或抗原的量成正比，可以使用 ELISA 读取器对其进行量化。

ELISA 测试的显着特点

ELISA 测试由于其简单性和灵敏度而越来越多地用于检测抗原（传染原）或抗体。 它与放射免疫测定 (RIA) 一样灵敏，并且只需要微升量的测试试剂。 现已广泛应用于激素、毒素、病毒等多种抗体和抗原的检测。

1. ELISA检测具有高灵敏度和特异性

2. 定量 ELISA 测试的结果可以直观地读取

3. 一次可以完成大量测试

4. ELISA 专为一次筛查大量标本而设计，适用于监测和集中输血服务。

5. 用于 ELISA 的试剂稳定，可以在地区和农村实验室分发，但由于 ELISA 需要先进的设备和熟练的技术人员来进行测试，因此它们的使用受到某些情况的限制。