小鼠胰岛的分离

利用胶原酶灌注法分离小鼠胰岛 ， 具体操作步骤如下：

1)腹腔注射三溴乙醇麻醉小鼠。

2)腹部消毒, 打开腹部暴露胆管和胰管。

3)胰腺原位灌注3 mL预冷的胶原酶XI, 使胰岛充盈。

4)迅速摘取胰腺放入装有5 mL HBSS (Hanks Balanced Salt Solutions, HBSS) 平衡液的50 mL离心管中, 37℃水浴19 min。

5)孵育期间手动摇匀离心管2-3次, 直至看见均质化的胰腺悬浮液。

6)将离心管置于冰上, 加入25 mL 含有CaCl2的HBSS液终止消化。4℃, 290 g离心30 s, 弃上清。

7)再次加入含CaCl2的HBSS液清洗沉淀一次, 4℃, 290 g离心30 s, 弃上清留沉淀。

8)加入15 mL 含CaCl2的HBSS液, 重悬。

9)用70 μm细胞筛将重悬液过滤, 倒转细胞筛, 细胞筛下方放置培养皿。

10)用RPMI 1640培养液冲洗倒置的细胞筛, 过滤后残留在细胞筛的胰岛被冲入培养皿中, 37℃培养箱中孵育培养。

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