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百萤 胱天蛋白酶Caspase抑制剂Z-LETD-FMK实验方案

2023-09-01 10:55 作者:百萤生物  | 我要投稿

一.百萤 胱天蛋白酶Caspase抑制剂Z-LETD-FMK参数

 

分 子 量      654.69

溶      剂      DMSO

存储条件     在-15摄氏度以下保存,避光防潮

 

 

二.百萤 胱天蛋白酶Caspase抑制剂Z-LETD-FMK概述

 

Z-LETD-FMK是一种细胞渗透性不可逆的caspase蛋白酶8抑制剂,与caspase-8的催化位点结合,在诱导凋亡中起重要作用。Z-LETD-FMK与caspase-8的结合抑制了该蛋白酶的活性,使其能够抑制与caspase-8相关的凋亡事件。为了抑制细胞凋亡,应在诱导细胞凋亡的同时添加Z-LETD-FMK。FMK衍生的肽可作为有效的不可逆抑制剂,而不会增加细胞毒性作用。

图1.胱天蛋白酶Caspase抑制剂Z-LETD-FMK化学结构

三.百萤 胱天蛋白酶Caspase抑制剂Z-LETD-FMK实验方案

溶液配制

储备溶液配制

Z-LETD-FMK储备溶液配制:在Z-LETD-FMK中添加适量的DMSO,制成2-5 mM Z-LETD-FMK储备液。注意:将未使用的Z-LETD-FMK储备溶液分装在-20°C下。

 操作步骤

1. 根据需要处理样品以诱导凋亡。

2. 添加Z-LETD-FMK。
注意:我们建议使用终浓度为10-100 µM的Z-LETD-FMK抑制胱天蛋白酶,例如对caspase-8抑制50 µM。
注意:孵育的佳时间和浓度需要通过实验确定。

3. 根据需要对样品染色。

4. 用适当的仪器检测荧光强度。 


图示

 

图2.胱天蛋白酶Caspase抑制剂Z-LETD-FMK将Jurkat细胞已200000个细胞/90μL/孔接种在Costar黑色壁/透明底部96孔板中。用1μm星型孢素处理细胞5小时。加入Z-LETD-FMK并与星型孢素共孵育。使用 Flexstation 3荧光微板读数器(Molecular Device)在 Ex/Em = 540/620nm (Cutoff = 610nm)处测量荧光强度。



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