Image J操作：WB定量和划痕实验距离测定

01、Image J介绍①菜单栏：文件(File)，编辑(Edit)，图形(Image)，处理(Process)，分析(Analyze)，插件(Plugins)，窗口(Windows)，帮助(Help)。②工具栏：可编辑文件的大小、标记、测量、填充等。③状态栏：正在处理文件的状态、大小、单位等显示。

工具栏介绍：

02、WB操作步骤一、WB数值化方法灰度分析（Band density）计算机图像分析仪根据图像颜色深浅分为256个级别。灰度值越小物体颜色越深
光密度分析光线通过溶液（物质）前的入射光强度与该光线通过溶液（物质）后的透射光强度比值的对数。光密度值越大，物体颜色越深，阳性物质相对含量越大。
二、操作步骤导入/打开：File→Open（Ctrl+O）→ 弹出对话框→选择文件夹→找到WB条带。

Tips：直接将需要分析的图片拖入【状态栏】
转化灰度图：
①Image→Type→8-bit

②Process→Subtract Background（Rolling ball radius默认50），勾选【Light background】

设置定量参数：③Analyze→Set Measurements

④进行需要观察结果项的勾选

设置单位：⑤Analyze→Set Scale

⑥Unit of length→【Pixels】

转换亮度：[Edit] → Invert

选择条带：【工具栏】——区域选择工具。选择分析的单个条带

分析：【Anlyze】——选项

结果分析：

对应：对应研究基因和内参的IntDen，以研究基因/内参基因。

03、划痕距离测定一、标尺校正不进行标尺校正，得到的长度单位为pixel（像素），面积单位为平方像素（pixel2）。

1、打开一张带有标尺的图片；2、选择直线工具，在标尺上沿着标尺画一条直线。

3、点击【Analyze】→Set Scale；

4、点击Click to Remove Scale；Known distance填250μm；Unit of length填入单位（μm）；选择Global为对之后打开的图片都有效（必选项）。

二、面积检测方法划痕距离测量为等效测量划痕宽度平均值=划痕空隙面积/长度。细胞迁移率=(0h划痕宽度-培养后划痕宽度)/0h划痕宽度×100%。

转化灰度图：Image→Type→8-bit

增强对比:1、点击【Process】→【enhance contrast】；2、【Saturated pixels】中选择0.3，默认Normalize；3、点击【OK】

平滑边缘：Process→Smooth（Ctrl+shift+S）

寻找边缘：Process→Find Edges

阈值设定：【Image】→Adjust→Threshold（Ctrl+shift+T）

设置和选择：1、选中为红色，调节阈值为0-20。点击【Apply】

2、选择【工具栏】中的魔棒工具，在划痕面积处点击。

3、弹出的Wand Tool中的【Tolerance】选择2，点击OK。4、【Anlyze】-Measure

【供学习交流使用】