核糖凝胶电泳技术-3（科学推论）

从 DNA 凝胶中得出科学推论

分子生物学家通常使用带有 DNA 条带的琼脂糖凝胶来确定某些事物。 以下是科学家从可视化电泳中获得的一些最常见的见解：

DNA 混合物中的 DNA 片段数：

当使用琼脂糖凝胶对 DNA 进行电泳时，分子会根据大小进行分类。 因此，如果样本中有 X 个不同的片段，我们就会在凝胶中看到 X 个条带。

因此，可以通过在凝胶中运行一小部分 DNA 来推断 DNA 样本中的 DNA 片段数量。

图 1. 第一个泳道（从左起）有一个 DNA 片段，而第二个泳道有两个片段。

在许多情况下，此信息可能很重要； 例如，当实验者正在评估质粒是否已被消化时。

未消化的质粒在凝胶中出现三个条带，而单位点消化（线性化）的质粒将仅显示一个条带。

此外，限制性核酸内切酶是仅在一个位点还是多个位点切割质粒，可通过观察消化后的质粒样品电泳时出现在凝胶上的条带数量来推断。

DNA 样本中片段的大小：

如下图 2b 所示，通过在琼脂糖凝胶中沿着 DNA ladder 运行 DNA 样本，可以估计单个片段（显示为条带）的大小。

DNA ladder 是多个不同分子量的 DNA 片段的混合物。 大小是已知的。 当 ladder 在琼脂糖凝胶上运行时，片段会根据它们的大小进行分类。

分开的带看起来像梯子的梯级，这就是 DNA ladder 得名的地方。

图2b：琼脂糖凝胶中沿着 DNA ladder 运行 DNA 样本

图 3. 第二条泳道（从左起）是 DNA  ladder。 基于它，可以估计在泳道 1、3 和 4（左起）上运行的片段的大小。

确认 DNA 片段的精确分子量对于许多实验程序至关重要，例如分子克隆。

在克隆感兴趣的 DNA 片段之前，有必要通过在凝胶中运行样品来确认其大小。

聚合酶链反应 (PCR) 产物的评估也使用琼脂糖凝胶电泳进行。

估计样品中 DNA 的浓度：

如果参考 DNA 样本（例如，DNA ladder）的浓度已知，则未知样本的浓度可以通过将其在凝胶上的条带强度与已知浓度的样本进行比较来估计。

图 4. 从左起第一条泳道：具有已知 DNA 浓度条带的 DNA 阶梯。 左数第二和第三泳道：未知浓度的 DNA 条带。 通过使用密度测定软件将这些条带的荧光强度与阶梯条带的荧光强度进行比较，可以计算出这些样品的浓度。