百萤 iFluor 555小麦胚芽凝集素(WGA)缀合物这种化学试剂的实验方案

麦胚凝集素（WGA）是一种与N-乙酰-D-葡萄糖胺和唾液酸结合的凝集素。它是目前研究多、应用广泛的一类凝集素。由于WGA与糖缀合物结合，其衍生物和缀合物被广泛用于标记细胞膜和纤维化瘢痕组织，用于荧光成像和分析。WGA的糖结合特异性与β-1,4-GlcNAc-连接残基的序列，即几丁质酶有关。每个单体包含两个相同的非相互作用的结合位点，它们与3或4β-1,4-GlcNAc单元互补。在所检测的单糖中，只有GlcNAc与WGA结合。甘露聚糖不结合，而GalNAc只能弱结合。WGA与含有Galβ（1--4）GlcNAcβ（1--3）重复序列（即聚乳糖胺型聚糖）的大寡糖中的内部GlcNAc残基具有高亲和力结合。N-乙酰神经氨酸只参与与WGA的低亲和力相互作用。WGA显示了复杂的糖类特异性模式，可用于复杂碳水化合物的结构分析。iFluor 555小麦胚芽凝集素（WGA）缀合物可能是亮的WGA缀合物。它表现出了iFluor的明亮和红色荧光。iFluor 555小麦胚芽凝集素（WGA）缀合物与唾液酸和N-乙酰氨基葡萄糖残基结合，如AF555 WGA结合物那样。

 iFluor 555小麦胚芽凝集素(WGA)缀合物适用仪器

荧光显微镜

激发：           Cy3/TRITC滤波片

发射：           Cy3/TRITC滤波片

推荐孔板：    黑色透明

iFluor 555小麦胚芽凝集素(WGA)缀合物实验方案

溶液配制

储备溶液配制 

iFluor 555 小麦胚芽凝集素 (WGA) 缀合物储备液 (200X)

将 500 µL ddH2O 添加到粉末小瓶中，制成 2 mg/mL 的储备溶液。 注意：重新配制的缀合物溶液可在 2-8 °C 下短期储存，或在 -20 °C 下长期储存。

工作溶液配制 

iFluor 555-小麦胚芽凝集素 (WGA) 缀合物工作溶液 (1X)

将 5 μL 200X WGA 储备溶液添加到 1 mL HHBS 缓冲液中。
注意：不同细胞系的优化染色浓度可能不同。 活细胞的推荐起始浓度为 5-10 µg/mL。

操作步骤

1.活细胞染色
1.1 用 HHBS 缓冲液清洗细胞两次。
1.2 添加 100 µL iFluor 555-WGA 工作溶液。
1.3 将细胞与 WGA 工作溶液在 37°C 下孵育 10-30 分钟。
1.4 用 HHBS 缓冲液清洗细胞两次。
1.5 使用  Cy3/TRITC 滤光片组在荧光显微镜上成像细胞。

2.固定细胞染色
2.1 在PBS中使用4％的甲醛固定细胞。
注意：对于固定细胞膜染色，建议在没有透化步骤的情况下进行染色。固定后透化步骤会导致细胞内区室染色，如高尔基体和内质网 (ER) 结构染色。
2.2 添加 100 µL iFluor 555-WGA 工作溶液。
2.3 在室温下用 WGA 工作溶液孵育细胞 10-30 分钟。
2.4 用 HHBS 缓冲液清洗细胞两次。
2.5 使用  Cy3/TRITC 滤光片组在荧光显微镜上成像细胞。

图示