Cy5荧光标记抗体/蛋白试剂盒 (10~100 mg标记量)相关研究

荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轮双键体系化学结构的化合物，受到紫外光或蓝紫光照射时，可激发成为激发态，当从激发态恢复基态时，发出荧光。蛋白荧光标记技术利用荧光物质共价结合在目标分子的某个基团上，利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。瑞禧生物小编给大家分享Cy5荧光标记抗体/蛋白试剂盒 (10~100 mg标记量)的制备，一起来看！

一. 产品简介

Cy5荧光标记抗体/蛋白试剂盒可以通过抗体/蛋白上的伯胺基团（如赖氨酸），简单、快速地实现抗体/蛋白与Cy5荧光染料的共价偶联。此为通用型试剂盒，适合Cy5荧光标记各种分子量不一致的抗体/蛋白。偶联在30分钟内即可完成，偶联效率可达70%左右。使用超滤管纯化，可快速去除多余的Cy5荧光染料，且不会损失抗体/蛋白。

二. 试剂盒组成与存储

收到后将Cy5-mix(含10 % Cy5染料)储存在-20⁰C。Coupling Reagent、Cy5-mix溶解液可在+4°C短期保存或-20°C长期保存。

试剂盒组成数量保存温度Cy5-mix (含10 % Cy5染料)10 mg-20 ℃Coupling Reagent2 mL+4 ℃或-20 ℃Cy5-mix溶解液2 mL+4 ℃或-20 ℃超滤管 (3.5kD)2 支室温

三. 实验步骤

1. 取待标记抗体/蛋白(1~10 mg)，溶解于1 mL纯水中，加入100 μL Coupling Reagent，混合均匀待用。

注：抗体/蛋白在1~10 mg内均用1mL纯水溶解，并加入100 μL Coupling Reagent。超出此范围，请按比例增减，如0.5 mg抗体/蛋白，建议使用0.5 mL纯水溶解并加入50 μL Coupling Reagent。

(以下步骤按标记1 mg抗体/蛋白为例)

2. 根据荧光标记需求程度，称取0.1 ~1 mg Cy5-mix固体加至第1步溶液，充分混合溶解。

注：(a) 若Cy5-mix用量超出1mg，可能导致荧光标记过量，引起荧光部分淬灭;

(b) 若低于1 mg的Cy5-mix难以称取，可先取1 mg Cy5-mix固体溶解于100 μL Cy5-mix溶解液，再按需取Cy5-mix溶液加至第1步溶液。由于Cy5-mix溶解后易分解，溶液须尽快使用且不可保存。

3. 室温避光反应30min，延长反应时间不影响偶联效率。

4. 将反应液转移至超滤管，10000 rpm超滤5 min，即可除去未反应的Cy5-mix，为提高纯度，可加入纯水重悬抗体/蛋白，重复超滤1~2次。

5. 使用纯水或PBS将超滤管截留下的抗体/蛋白重悬，即得到Cy5荧光标记的抗体/蛋白溶液。

四. 注意事项

1.荧光标记前抗体/蛋白中可能含有干扰组分，建议低于以下比例:

干扰组分建议比例甘油< 50%叠氮化钠< 0.1%含氨基的缓冲液（如Tris）0%pH7.0-8.5伯胺（如氨基酸、乙醇胺等）0%硫醇（如巯基乙醇、DTT等）0%

注：若以上干扰组分超出建议比例，可先通过超滤管或透析等方式除去干扰成分，再使用本试剂盒进行抗体/蛋白荧光标记。

2. 偶联后的抗体/蛋白应避光保存。通常在4 ℃下可保存6~12个月。如需保存更长时间，可加入冷冻保护剂如50%甘油，在-20℃保存。

RXYWX.2022.7.27