不懂？但你得知道—体内基因调控载体怎么选

不懂？但你得知道—体内基因调控载体怎么选

       腺病毒载体（adenovirus，Ad）不仅适用于细胞实验，还可以用于动物实验，而相比之下，大多时候腺相关病毒载体（Adeno-associated virus，AAV）更适合动物实验。往期，我们介绍了腺病毒和腺相关病毒及其包装和感染细胞的过程。本期通过二者的特点，小编为大家梳理一下在体内做基因调控可以从哪些方面考虑选择合适的病毒载体。

1、  实验周期：动物实验的建模周期是影响载体选择的首要因素。对于实验周期较长或慢性疾病的建模，这些实验周期一般需要2~6个月甚至更长时间，通常要用到AAV载体，尽可能减少实验动物损伤的同时维持长期调控作用；对于周期在1~4周的模型，Ad和AAV都可以作为考虑，但AAV最好用于4周左右的模型；对于3天~7天的急性实验模型，Ad更适合。

2、  表达时间：病毒的表达时间和实验周期相互关联。Ad感染后1~2天开始表达，3~4天在体内达到表达高峰，可以维持1~3周的表达，因此可用于急性模型和一个月内的实验周期，为期一个月的实验可以在首次注射后两周再补打一次病毒，保证实验期间最佳表达效果。AAV表达周期较长，通常感染2周后开始表达，3~4周达到表达高峰，可维持长达3~6个月的表达，适用于慢性模型；实验周期超过2个月的，通常建议1个半月或2个月补打一次。

3、  组织/细胞特异性： 体内实验我们可能需要感染特定组织器官或细胞，除了选择合适的注射方式外，结合特异性血清型和启动子能更好的达到实验目的。AAV有12种血清型，可以识别相应的细胞表面受体，从而感染特定的组织细胞（图1）。为了使感染特异性更强，科研人员对野生型血清型进行改造筛选，由此衍生出更多更具靶向性的AAV血清型（图1）。

图1  AAV对不同组织的特异性血清型

带上特异性启动子可以使外源序列在目的细胞或组织中表达（表1）。而Ad的感染表达特异性依赖特异性启动子。总的来说，AAV可靶向组织细胞的选择性更多。

表1  组织/细胞特异性启动子

4、  载体容量：Ad可以插入5kb左右的外源序列；AAV的容量相对小些，最大可到3kb左右。若超过载体容量会导致滴度下降甚至出毒困难，所以外源基因大小也是病毒选择需要考虑的因素。

5、  安全性：病毒导致实验动物的免疫反应会引起实验结果偏差，导致数据不准确。AAV目前仍未发现与任何疾病的发生有关，免疫原性极低，对实验动物的状态影响较小。而Ad的免疫原性相对高，可能会引起免疫炎症反应。

 以上5个方面内容需要全面综合考量，才可以选定符合实验设计的病毒载体，必要时可以调整实验策略或在并特性间做取舍，如果有拿捏不准的地方，欢迎随时与我们联系沟通。汉恒生物专注病毒包装十余年，有丰富的实践经验，如有病毒需求或技术问题欢迎咨询！