使用胎牛血清后常见的问题|杭州昊鑫生物

1、细胞培养中出现黑点是污染吗？

更换血清后发现细胞镜下观察有黑点，需要肉眼观察细胞培养液有无混浊的情况出现，其次镜下观察细胞中的黑点是否有游动，如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。

如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现有可能与以下几种情况有关：

①细胞生长过老，破碎的细胞残骸；

②血清等级不足以维持良好的细胞生长

③配制培养基的PH值偏高，不宜细胞生长；

④配制培养基的水质、容器不合格；

⑤培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。

 

2、更换血清后细胞出现死亡？

培养细胞的死亡原因有多种情况，常见的有以下几种：

①培养箱内温度波动过大；

②细胞在冻存或复苏过程中损伤；

③培养液渗透压不正确；

④培养液中有毒代谢产物堆积；

⑤胰蛋白酶消化过度；

⑥微生物污染；

⑦细胞在传代时未计数、记活率，可能导致细胞接种密度过低或过高不能正常铺瓶生长。

 

3、脐带间充质干细胞原代培养，细胞出现裂解死亡的情况。

从细胞图片分析，客户在原代分离组织初期未见细胞爬出、或有零星细胞生长，未见细胞集落，建议客户对原代分离的操作步骤做排查。

 

4、神经母细胞瘤培养，增殖慢，细胞易飘起，前期用的是gibco澳胎。

改客户试用的是优级胎牛血清根据神经类细胞的分型建议以及客户之前使用的是gibco澳胎血清培养，还是建议客户试用特级胎牛血清对细胞进行培养。

 

5、乳腺癌细胞传至4带后增殖较慢，前期生长不错，增长1天左右可继续传代，细胞状态良好。增加抗生素浓度后，细胞生长较慢。

建议在排除污染情况下，降低抗生素浓度，从消化、传代是否过密、细胞状态不佳或老化等方面排查原因。

 

6、客户培养HT22鼠源神经细胞，特级血清培养，细胞生长正常，单总是细胞有大量聚团现象。

有细胞生长容易聚团建议客户从传代时胰酶消化不当、细胞生长特性、血清是否存在批间差以及有无可能感染支原体等方面排除。排查了因消化原因、细胞特性等原因，疑似支原体导致的细胞聚团，添加了支原体清除剂，使用3天，聚团现象好转，停用就反复。建议继续使用支原体清除剂稳定一周后再停用观察细胞状态。