一小时搞定选必三！课本回归速刷版《生物技术与工程》

选修三

发酵工程

消毒 灭菌（高温灭菌）

配置 调ph 灭菌 倒平板（固体培养基） 接种 分离 培养

平板划线法 稀释涂布平板法（计数）

倒平板 防止冷凝水滴落产生污染

每一次划线前后灼烧接种环

尿素分解菌取样 十倍稀释 无菌水 30-37恒温培养箱中培养 统计比实际少 显微计数法（血细胞计数法） 以尿素为唯一氮源

刚果红和纤维素 透明圈筛选 尿素周围酚红

细胞工程

全能性

植物组织培养

外植体（只能消毒不能灭菌）（先用酒精再用次氯酸钠，每次都要用无菌水清洗）-脱分化-愈伤组织-再分化-胚状体-芽根-个体

生长素（根）比细胞分裂素（芽）

植物体细胞杂交 

先用纤维素和果胶酶去除细胞壁 获得原生质体

融合方法：电融合法 离心法 聚乙二醇 获得杂种细胞-愈伤组织

意义：打破生殖隔离，实现远缘杂交育种

植物细胞工程应用

1、快速繁殖（高效、快速实现大量繁殖 保持优良品种的遗传特性（无性生殖））

2、作物脱毒（病毒）取茎尖

3、单倍体育种 花药离体培养 生殖细胞全能性 秋水仙素染色体加倍 极大缩短育种年限

4、突变体的利用

动物细胞工程

动物细胞培养 

添加血清 定期更换培养液 co2维持培养液的ph

用胰蛋白酶和胶原蛋白酶制成细胞悬液（一种悬浮生长 一种贴壁生长（接触抑制））

原代培养 分瓶 传代培养 悬浮培养直接离心法 贴壁重新用胰蛋白酶处理再用离心

干细胞培养

诱导多能干细胞 不会发生免疫排斥

动物细胞融合技术

灭活病毒诱导法 peg融合法

单克隆抗体（利用了动物细胞融合技术、动物细胞培养）

用特定的抗原对小鼠免疫 脾中产生特定抗体的b淋巴细胞 与骨髓瘤细胞融合 用选择培养基筛选 获得杂交瘤细胞（大量增殖 产生抗体）抗体检测筛选（与特定抗原）小鼠腹水

优点：灵敏度高 与特定抗原发生特异性结合 大量制备

动物细胞核移植

胚胎移植比体细胞方便

卵母细胞体外培养到减二中期 将供体细胞注入去核卵母细胞

胚胎工程

精子获能

两个极体 作为受精标志

桑葚胚 囊胚（滋养层）

胚胎移植（同种）

子宫不会发生免疫排斥 同期发情处理（使生理状态相同）供体超数排卵处理（促性腺激素）

优势：充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力

胚胎分割（无性繁殖）

取滋养层做dna分析鉴定性别

基因工程

限制酶（限制性内切核酸酶）识别双链特定 切磷酸二酯键

Dna连接酶 两个dna片段

载体 质粒（具有自我复制能力）上有复制原点、目的基因、标记基因

Dna不溶于酒精 能溶于2mol/L的NaCl溶液 沸水浴遇二苯胺试剂变蓝色

一、目的基因的筛选和获取

获取目的基因：人工合成、PCR、构建基因文库

             PCR原理：DNA的半保留复制（不可以扩增mRNA）mRNA逆转录cDNA

                变性90以上 复性50左右 延伸72左右

二、基因表达载体的构建

目的基因 标记基因 启动子（RNA聚合酶识别和聚合的部位） 终止子

限制酶切割位点位于启动子和终止子中间

两种限制酶切割避免自身环化反向连接

三、目的基因导入受体细胞

花粉管通道法、农杆菌转化法、显微注射法（用ca离子处理获得感受态) 转化是指目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达

四、目的基因的检测与鉴定

PCR、核酸分子杂交（探针）

表达：抗原-抗体杂交