如何培养HaCaT人永生化角质形成细胞？它的培养条件及注意事项~

图一：PUMC数据库中HaCaT的图片

HaCat人永生化表皮细胞，该细胞源自一位 62 岁患有黑色素瘤男性的病灶外围正常皮肤，广泛用于皮肤生物学和分化研究。在标准培养基和胎牛血清的高钙含量培养条件下，HaCaT细胞具有部分至完全分化的表型。

HaCat细胞为贴壁细胞，显微镜下呈典型上皮细胞样，角蛋白、角化细胞交联外膜蛋白、中间丝相关蛋白表达呈阳性。

▲ 本文为大家介绍HaCat细胞的培养条件及注意事项。

【细胞特性】

①  细胞难消化，需要消化10分钟左右。

②  细胞有聚团堆叠生长的特性，注意细胞接种要均匀，及时传代。

【细胞培养条件】

MEM（GIBCO CAT:11095,或同配方）+10%胎牛血清（南美进口级别）+ 1X 非必需氨基酸（CELLCOOK CAT:CM1008S/L）

【传代比例】

1:3传代（培养面积比）

【传代方式】

消化8-10分钟

【换液频率】

2~3天换液1次

【冻存液配方】

MEM+10%FBS+1X 非必需氨基酸+10%DMSO

【培养要点】

细胞特别难消化，需要消化10分钟左右，且在正常培养过程中会有大量分泌物生成，所以在消化前一定要用不含钙镁离子的PBS润洗2-3次，消化过程中放入培养箱中消化，可提高消化效率

【培养等级】

++

参考文献

01此文献HaCaT细胞购自赛库生物

[1]Zhou Y ,  Huang Z ,  Su J , et al. Benserazide is a novel inhibitor targeting PKM2 for melanoma treatment[J]. International Journal of Cancer, 2020. 

DOI：10.1002/ijc.32756

02

此文献HaCaT细胞购自赛库生物

[2]Yinghui, Wang, Xuyi, et al. miR-27a Downregulation Promotes Cutaneous Squamous Cell Carcinoma Progression via Targeting EGFR.[J]. Frontiers in oncology, 2019, 9:1565-1565. 

DOI：10.3389/fonc.2019.01565