艾美捷游离巯基检测试剂盒试剂准备和样品制备

艾美捷游离巯基检测试剂盒提供了一个简便方法检测血液、尿液、组织匀浆和细胞裂解液中游离的硫醇.利用一个专利的荧光指示剂作用于硫醇时将会产生强荧光信号，以对应硫醇的含量.

 

 

艾美捷游离巯基检测试剂盒试剂准备：

1.硫醇含量测定缓冲液（10X）-（编号700341）

小瓶中含有5 ml浓缩含量测定缓冲液。用45ml HPLC级水稀释5ml含量测定缓冲液浓缩液。该最终缓冲液（100mM磷酸钾，pH 7.4，含1mM EDTA）应用于测定。当储存在-20°C时，该稀释缓冲液可稳定六个月。

2.荧光硫醇检测器-（编号700006）

每个小瓶含有300µl检测器。测定前，用4.95 ml稀释的测定缓冲液稀释50µl提供的检测器。这是足以测定一个平板的溶液。该稀释溶液在室温下稳定一天。尽可能避免暴露在光线下。将未稀释的检测器储存在-20°C。

3.硫醇-谷胱甘肽标准品-（编号700343）

小瓶中含有约10mg还原型谷胱甘肽标准品。小心地称出1 mg并将其溶解在3.25 ml稀释的硫醇含量测定缓冲液中。用990µl稀释的硫醇含量测定缓冲液稀释10µl该溶液。该稀释标准溶液的浓度为10µM。溶液准备好用于制备谷胱甘肽标准曲线（见第11页）。谷胱甘肽标准溶液在室温下稳定一天。

4.巯基半胱氨酸标准品-（编号700344）

该小瓶含有约10mg半胱氨酸标准品。小心地称出1 mg并将其溶解在3.06 ml稀释的硫醇含量测定缓冲液中。用995µl稀释的硫醇含量测定缓冲液稀释5µl该溶液。该稀释标准溶液的浓度为10µM。溶液准备好用于制备半胱氨酸标准曲线（见第11页）。半胱氨酸标准溶液在室温下稳定一天。

 

艾美捷游离巯基检测试剂盒样品制备：

血浆

1.使用抗凝剂如肝素或柠檬酸盐收集血液。

2.在4°C下以700-1000 x g离心血液10分钟。用移液管移走顶部黄色等离子层，而不干扰白色褐黄色层。

3.将血浆储存在冰上，直到测定或在-80°C下冷冻。血浆样品将稳定一个月。应避免重复冷冻/解冻循环。

4.血浆应在分析前用稀释的测定缓冲液稀释1:5。

血清

1.在不使用抗凝剂如肝素或柠檬酸盐的情况下采集血液。

2.让血液在25°C下凝结30分钟。

3.在4°C下以2000 x g离心血液15分钟。用移液管移走顶部黄色血清层，不干扰白色血沉棕黄层。

4.将血清储存在冰上。如果当天未进行分析，则在-80°C下冷冻。样品将稳定一个月。应避免重复冷冻/解冻循环。

5.测定前，血清应用稀释的测定缓冲液稀释1:5。

组织匀浆

1.解剖前，用PBS（磷酸盐缓冲盐水）溶液（pH 7.4）冲洗组织，以去除任何红细胞和血块。

2.将组织均匀化在每克组织5-10毫升冷缓冲液（即，100mM Tris-HCl，pH 7.8）中。

3.在4°C下以10000 x g离心15分钟。

4.取出上清液并储存在冰上。如果当天未进行分析，则将样品储存在-80°C。样品将稳定至少一个月。

 

游离巯基检测试剂盒文献参考：

1.Wlodek, L. Beneficial and harmful effects of thiols. Polish Journal of Pharmacology 54, 215-223 (2002).

2.Lash, L.H. and Jones, D.P. Distribution of oxidized and reduced forms of glutathione and cysteine in rat plasma. Arch. Biochem. Biophys. 240, 583-592 (1985).

3.Wendel, A. and Cikryt, P. The level and half-life of glutathione in human plasma. FEBS Lett. 120, 209-211 (1980).

4.Dickenson, D., Forman, H. Cellular glutathione and thiols metabolism.

Biochemical Pharmacology 64, 1019-1026 (2002).