百萤钙黄绿素蓝，AM是钙黄绿素蓝的细胞渗透性版本。进入活细胞后，弱荧光钙黄绿素,AM被水解成钙黄绿素，其激发/发射最大值与钙黄绿素蓝、DAPI、HOECHST和AMCA相似。这种与典型的绿色和红色荧光团（如FITC、TMR和德克萨斯红）的特殊光谱分离为多重实验提供了额外的选择。

1.百萤钙黄绿素,AM适用仪器

 

流式细胞仪

Ex(nm) ：        350/405纳米激光

Em(nm)：       450/40纳米过滤器

仪器规格 ：     Pacific Blue Channel

 

 荧光显微镜

Ex(nm) ：       DAPI过滤器集

Em(nm)：       DAPI过滤器集

推荐孔板：     黑壁/清底

 

 荧光酶标仪

Ex(nm)：        360

Em(nm) ：       450

Cutoff ：          420

推荐版块：      黑壁/清底

仪器规格：      底读模式

2. 百萤钙黄绿素,AM工作溶液的制备

     在您选择的缓冲液（例如Hanks和Hepes缓冲液）中制备1至10µM的钙黄绿素蓝，AM工作溶液。对于大多数细胞系，建议使用终浓度为4至5µM的钙黄绿素蓝,AM溶液。细胞加载所需的指示剂的确切浓度必须根据经验确定。

注意：如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，则可以将丙磺舒（1-2.5mM）或磺吡酮（0.1-0.25mM）添加到工作溶液中以减少去脂化指示剂的泄露。

 

3. 百萤钙黄绿素,AM样本实验方案

（1）准备用于成像的细胞；

（2）去除细胞培养基并用无血清缓冲液洗涤细胞一次以去除任何剩余的培养基；

注意：细胞培养基中的血清可能含有脂酶活性，这会增加背景干扰。

（3）将钙黄绿素蓝，AM工作溶液添加到培养物中；

（4）在37℃下孵育细胞30-60分钟；

（5）用HHBS或您选择的缓冲液（包含阴离子转运抑制剂，如1mM丙磺舒）替换染料工作溶液，以去除任何多余的探针；

（6）使用配置DAPI过滤器组的荧光显微镜、配置UV/紫激光和450/40nm过滤器（Pacific Blue Channel）的流式细胞仪或Ex/Em=360的荧光板读取器测量荧光强度/450纳米截止420纳米。

 

    以上是百萤整理的钙黄绿素蓝,AM在实验过程中适用的仪器，工作溶液的配置以及样本实验方案，希望对正在做实验或者准备做实验的朋友有所帮助。