真核DNA分离（原理、材料、步骤）-1

DNA提取是将 DNA 从蛋白质、膜和细胞中包含的其他细胞材料中分离出来的过程。在人类和植物细胞等真核细胞中，DNA 在称为细胞核的细胞器中组织为染色体。这些细胞还具有脂质双层外膜和含有蛋白质、糖、脂质和各种类型和功能的无机离子的细胞质。 真核细胞还包含其他被称为细胞器的膜封闭区室。因此，为了从这些细胞中分离 DNA，必需的三个基本步骤包括：裂解、降水、纯化。

真核DNA分离原理

DNA 分离的第一步是细胞裂解，其中细胞和细胞核被打开以释放内部的 DNA。这可以通过机械破碎方法（使用组织匀浆器（如小型搅拌器）、研钵和研杵，将组织切成小块）或通过使用去垢剂和蛋白酶 K 等酶裂解来释放 DNA 和溶解细胞蛋白质。该过程中通常使用提取缓冲液，由 50mM Tris、pH 8、25mM EDTA、200mM NaCl、1% SDS 等组成。

• Tris 缓冲液有助于维持 pH 值。

• EDTA 结合二价金属离子（Ca2+、Mg2+、Mn2+），这些离子可以与 DNA 的阴离子 PO43 基团形成盐。它还会破坏细胞膜的稳定性，防止 DNA 沉淀并抑制 DNA 酶。

• NaCl 有助于松开细胞壁，增加 DNA 的溶解度和稳定性。它还能使 DNA 从酒精溶液中沉淀出来。

• SDS 是一种阴离子洗涤剂，可破坏蛋白质之间的离子相互作用。

• 液体洗涤剂通过乳化细胞的脂质和蛋白质并破坏将细胞膜保持在一起的键而导致细胞膜分解。洗涤剂还会导致脂质和蛋白质从溶液中沉淀出来。

• 从破碎细胞中释放的 DNA 最后用冷无水乙醇或异丙醇沉淀。

• DNA 可溶于洗洁精溶液，但如果加入乙醇则不溶。添加酒精会沉淀 DNA，因为它会导致滤液中除 DNA 之外的所有成分都留在溶液中。