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Chelex100(介绍,提取DNA步骤)

2022-11-08 16:34 作者:biofount科研试剂  | 我要投稿

Chelex 100树脂是一种苯乙烯二乙烯基苯共聚物,含有成对的亚氨基二乙酸酯离子,其在结合多价金属离子中充当螯合基团。Chelex 100树脂的羧酸基团将其归类为弱阳离子交换树脂,但它与同类中的其他交换剂不同,它具有独特的高金属离子选择性和更高的键强度。该树脂可用于超纯化缓冲液和离子试剂:它可以清除金属污染物,而不会改变非金属离子的浓度。

Chelex 100螯合离子交换树脂对铜、铁和其他重金属离子的选择性高于钠和钾等一价阳离子。它对二价离子相对于一价离子的选择性约为 5,000:1,即使在高浓度盐溶液中,它也对过渡金属具有很强的吸引力。

  Chelex 100提取DNA的实验步骤:

  1. 将细胞材料加入1ml TE(1mM EDTA,10mM Tris:pH 8.0)中,并在室温下孵育10-15分钟。

  2. 将管高速离心以沉淀细胞材料并除去上清液。

  3. 将细胞物质沉淀重悬在5%Chelex 100中,将试管在56°C下孵育15-30分钟,然后放在沸水浴中放置8分钟。将试管高速离心2-3分钟以沉淀沉淀的蛋白质。

  4. 上清液含有DNA,可直接用于PCR含成对的亚氨基二乙酸根离子的共聚物。该树脂对多价金属离子(例如镁(Mg2 +))具有很高的亲和力;它螯合了多价金属离子,并有效地将其从溶液中去除。

Chelex 100提取DNA过程非常简单,使用小珠形式提供的Chelex'®100树脂使用蒸馏水制成5%的悬浮液。将细胞材料与100悬浮液在56°C孵育30分钟。此时,通常会添加消化大多数细胞蛋白质的蛋白酶K。在100°C下温育8-10分钟,以确保所有细胞都破裂并且蛋白质变性。然后将试管简单地离心以将Chelex 100树脂和变性的蛋白质沉淀在试管的底部,剩下含有要用于PCR的DNA的水溶液(图1)。 Chelex 100悬浮液是碱性的,pH值介于9.0和11.0之间,因此使用此程序分离的DNA是单链的。

chelex 100方法提取DNA的主要优点是:

  • 快速,耗时约1小时

  • 它很简单,不涉及液体在试管之间的移动,从而减少了意外混合样品的可能性

  • 成本很低;并且避免使用有害化学物质

  • 重要的是,它适用于各种法医样品

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