流式细胞术

清华平台笔记：

1.FCS不能绝对计数，除非买绝对计数的工具或者上样量体积确定的FCS。

2.鞘液如果是分选要用细胞等渗的PBS，如果只是分析用无菌水即可。【因为在流动室细胞流和鞘液这两种液体是层流（因为样本流比鞘液速度大）的时候，两种液体不会混合，细胞不会死，不影响检测；但是之后会混在一起，细胞会死。而且长时间用PBS会结晶，因此选无菌水。】

3.流动室：空间正交结构；封闭透明照射室。前者没挡板，后面有挡板。

高速上样和低速上样的区别：上样速度并不变，单位时间进的细胞多，只是轴流宽度变大，同时检测的细胞多，检测的误差会大。

△样品很稀可以选择高速，细胞多的话选低速即可。细胞周期实验只能选低速，否则数据假。

4.光学系统

光电倍增管PMT：光信号转化为电信号，并按比例放大这个信号。

△调电压就是调PMT的级联放大

细胞死亡皱缩，SSC变小；还会变成碎片，FSC变小。可以根据FSC和SSC来看细胞状态。

激发一般用单个值，发射一般用范围。

除了细胞周期坐标是线性的，其他都是log。

还可以导出PDF和experiment，就是圈门的方式。

阴性一般在10^3左右，一般调到10^2；阳性10^4。