HCMV病毒纯化流程

1. 收集培养的病毒：在HCMV病毒感染HFF细胞两周左右，HFF细胞出现明显的形态变化和裂解死亡。用细胞刮刀刮取大瓶底部的HFF细胞，并收集含有病毒的上清；

2. 反复冻融三次：37℃水浴锅融30min，冻30min，融30min，冻30min，融30min，释放HFF细胞内的病毒颗粒；

3. 离心去掉细胞碎片：6000rcf 4℃ 10min离心，吸取上清，弃掉底部的细胞碎片；

4. 超离：用0.45uM的滤嘴过滤上清，去除可能污染的细菌（HCMV病毒颗粒直径为120～200nm）。首先在超离管中加1ml 20％蔗糖，再加大约30ml的病毒上清，插冰上称重、配平（误差在0.05g以内），贝克曼台式超速离心机离心（离心程序20000rpm，1h30min，4℃）

   
   

5.重悬病毒：去掉上清，加500ul 5％蔗糖重悬，重悬液加入1.5ml的EP管，再分装到PCR管，每管20ul，放入-80℃冰箱保存（防止反复冻融）。