不同种类的PCR探针如何工作-Eclipse® 探针

Eclipse® 探针是一种 PCR 探针，用于通过互补靶向 DNA 序列。 Eclipse® 探针有四个组成部分：荧光报告基因、猝灭剂、小沟结合物和寡核苷酸。 与目标序列的比对导致报告基因和淬灭剂之间的物理距离有利于荧光。

小沟结合剂 (MGB)：小沟结合剂是一种新月形的小分子，通过小沟与 DNA 相互作用。 由于与碱基对边缘结合的氢，MGB 可以加入寡核苷酸序列。

图 1. Eclipse® 探针包含小沟结合物、荧光报告基因、猝灭剂和互补寡核苷酸。

Eclipse® 探针如何工作？

荧光报告基因位于寡核苷酸序列的 3' 端，猝灭剂位于 Eclipse® 探针的 5' 端。

MGB 与猝灭剂结合。 由于 Eclipse® 探针具有环状构象（如“U”型），淬灭剂靠近荧光报告基因，使其能够淬灭报告基因。

探针在退火阶段改变其构象并与目标序列杂交，从而将淬灭剂与荧光报告基因分离。

因此，报告基因可以发出荧光。 产生的荧光信号与样品中的扩增产物成正比。

图2. Eclipse® 探针结合导致构象变化，将报告基因与猝灭剂分开。 分开后，报告基因发出荧光。