基因编辑原理

CRISPR/Cas9系统是一种原核生物的免疫系统，是细菌用来抵抗病毒和外源质粒入侵的一种防御机制。目前最成熟且应用最广的是Type II的CRISPR/Cas9系统，其原理是利用gRNA特异性识别靶序列，并引导Cas9核酸内切酶对靶序列的PAM上游进行切割，从而造成靶位点DNA双链断裂，随之利用细胞的非同源末端连接（NHEJ）或同源重组（HDR）的方式对切割位点进行修复，实现DNA水平的敲除、敲入或点突变。

基因敲除方案

方案一

小片段敲除方案，gRNA设在外显子2两端的内含子中，敲除外显子编码碱基数为非3倍数，敲除后可造成移码。

方案二

移码敲除方案，gRNA设在外显子上，缺失的碱基数为非3倍数，敲除后可发生移码突变。

方案三

大片段敲除方案，将整个基因的编码序列敲除，达到大片段敲除的效果。

基因敲除载体分类

源井生物研发的基因敲除系列YKO载体，包括慢病毒载体、普通载体、腺相关病毒载体等，可广泛应用于体外或体内研究。

单gRNA载体

单gRNA载体，可应用于移码或片段敲除的方案中，设计2-3个gRNA同时转染细胞，可提高敲除效率，轻松实现基因敲除。

双gRNA载体

双gRNA载体，可应用于大片段敲除的方案中，设计dual-gRNA构建在一个载体上，转染细胞，可大大提高细胞转染效率。

质量控制标准：提供载体酶切和测序验证报告。

基因编辑载体应用：

针对不同基因编辑对象：不同类型细胞系，斑马鱼及大小鼠等。

针对不同基因编辑目的：移码敲除，片段敲除，精确敲除，定点突变，片段敲入等，提供对应的gRNA载体和打靶载体供客户选择。

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