色谱柱常见问题汇总（十）

一.我之前有了解到贵公司也有手性色谱柱，之前买过大赛璐的手性柱，其手性柱价格相比普通反相色谱柱，要高出很多倍，不知道是本身柱子装填技术的难度大还是其他什么原因？它的主要技术关键在什么方面？

         答：手性柱技术关键在于手性填料的开发，大赛璐公司在手性填料的生产技术方面申请了专利保护，别的厂商不能生产，导致手性柱价格居高不下。前几年传说该公司的专利保护期限快到了，国际国内有些公司就想着仿制生产。后来又听说专利还没到期，情况不明。

二.“样品与离子对生成紧密的结合物，离子对试剂掩藏化合物中的极性基团”这句话是什么意思？离子对怎么样掩蔽化合物中极性基团？不就是通过静电引力的作用形成离子缔合物，来降低其极性的吗？

         答：离子对色谱是解决强极性物质在反相色谱中保留能力不足的一个有效的途径。有些碱性极性物质，即使用100%水相做流动相，且无论在色谱柱能承受的pH范围内怎么去调节pH，保留能力都不够。建议如果需要分离的组分中全是可以离子态存在的，那还可以选择离子交换色谱进行分离。不然的话，就只有选择离子对色谱方法了，尽管它有流传的那么多副作用存在。

          离子对试剂含亲水基和疏水基，很像表面活性剂，所以一开始离子对色谱也称为“皂色谱”。离子对作用的机理有两种解释，你上面都已经提到了。到底是哪种解释对，尚无定论，实际上也没必要去定论，反正两种解释都通就可以了。主流的解释也是你先提到的机理，下面示意图更直观：

         我个人认为，两种机理都可能存在，要看离子对试剂、固定相和分析物这三者本身情况而定。如果离子对试剂的疏水端和固定相之间的结合力相对更强，示意图的作用机理会占上风。反之，离子对试剂亲水端和分析物导致掩藏极性端的作用力更强，你后面提到的机理更可能。总之，要看你用的什么离子对试剂，是何种的分析物等具体情况不同而不同吧。

三.我们在用的氨基柱时，有时候峰型突然变宽，有拖尾，用一段时间就又好了，不明白是什么原因造成的，如果要再生氨基柱的时候应该怎么做呢？是像您先前回答的问题中提到的，用一定比例的氨水冲洗吗？氨基柱可以直接用纯水冲洗吗？记得当时买的氨基柱那个使用说明书上说不能用纯水冲？是这样的吗？如果可以冲的话，一般冲多久？

         答：氨基柱的硅胶孔内的氨基浓度非常高（大约有1mol/L），在有水存在的时候，在孔内形成一个pH10左右甚至超过10的很强的碱性小环境，并会导致硅胶基体慢慢溶解。不过硅胶基体的溶解会生成酸性的硅醇基，又会降低孔内的pH值，延缓硅胶基体的溶解进程。一段时间后，两个相反的过程会达成一个动态平衡，从而稳定下来。对你问题提到的这个现象，我想到的是这个原因。

         氨基柱，要看氨基柱的应用模式，是正相还是HILIC？这两种模式的情况是大不相同的。正相使用，一般很怕有水。但HILIC模式应用，一般流动相是乙腈/水，是不怕水的。不过键合氨丙基基团非常容易水解，所以一般氨基柱不适宜保存有水的溶剂中。作为正相应用时，流动相中要求一点都不能含水，但清洗柱子上的污染物质，是可以含水的，因为水有强极性，在正相色谱上洗脱能力极强，当然不必用100%纯水。氨基柱具体冲洗方法，正相条件按照正相硅胶柱 的清洗方法，HILIC模式按C18柱的清洗方法。

四.采用国标用C18柱测定辣椒精辣度，将辣椒精中添加吐温系列乳化剂做成水溶辣椒精，请问乳化剂对C18柱是否有影响？

         答：乳化剂和离子对试剂类似，有极性端和非极性端，肯定会对C18柱有影响。不过如果辣椒精是极性物质，乳化剂的存在到可以提高其在C18柱上的保留能力。

五.公司按照国标测定辣椒红色素中苏丹红含量，标品分离很好，峰也不错，但是辣椒红色素由于跟苏丹红性质很相似，且颜色较深，分离效果很差，收得率很低，测定结果偏差很大。该如何处理样品？色素是否会降低柱效？

         答：色素不会降低柱效，但辣椒红色素主峰浓度过大，会影响与临近杂质峰的分离。可考虑稀释样品，或试试用柱效更高的柱子。

总结

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