特殊显微镜的使用

一.实验目的

1.了解特殊显微镜的构造原理，2.熟练掌握特殊显微镜的使用

二.实验材料

光学显微镜、相差显微镜、倒置显微镜、体视显微镜、暗视野显微镜、盖玻片、载玻片、洋葱、碘液

三.实验原理

1.光学显微镜:是利用光学原理，把人眼所不能分辨的微小物体放大成像，以供人们提取微细结构信息的光学仪器。显微镜是一 种精密的光学仪器 ，已有300多年的发展史。自从有 了显微镜，人们看到了过去看不到的许多微小生物和构成生物的基本单元细胞中

2.相差显微镜:相差显微镜是荷兰科学家Zernike于1935年发明的，用于观察未染色标本的显微镜。活细胞和未染色的生 物标本，因细胞各部细微结构的折射率和厚度的不同，光波通过时，波长和振幅并不发生变化，仅相位发生变化(振幅差)，这种振幅差 人眼无法观察。而相差显微镜通过改变这种相位差，并利用光的街射和干涉现象，把相差变为振幅差来观察活细胞和未染色的标本。相差显微镜和普通显微镜的区别是:用环状光闹代替可变光闹，用带相板的物镜代替普通物镜，并带有一个合轴用的望远镜。

3.倒置显微镜:倒置显微镜工作原理的详解倒置显微镜的组成和普通显微镜样， 只不过物镜与照明系统颠倒，前者在载物台之下，后者在载物台之上，用于观察培养的活细胞，具有相差物镜。倒置 显微镜工作时当同一种光通过细胞时，由于细胞不同部分对光的折射率不同，通过细胞的光线和未通过细胞的光线便可以产生相位差。

4.暗视野显微镜:暗视野显微镜的基本原理是丁达尔效应。暗视野显微镜在普通的光学显微镜上安装暗视野聚光镜后,由于该聚光器内部抛物面结构的遮挡,照射在待检物体表面的光线不能直接进入物镜和目镜,仅散射光能通过,因而视野是黑暗的。暗视野显微镜由于不将透明光射入直接观察系统，无物体时，视野暗黑，不可能观察到任何物体;当有物体时，以物体街射回的光与散射光等在暗的背景中明亮可见。在暗视野观察物体，照明光大部分被折回，由于物体(标本)所在的位置结构，厚度不同，光的散射性，折光等都有很大的变化。暗视野显微镜基本结构是将普通显微镜光学组加上挡光片

5.体视显微镜原理:体视显微镜结构是由一个共用的初级物镜，对物体成像后的两个光束被两组中间物镜亦称变焦镜分开，并组成一定的角度称为体视角般为12° -15° ， 再经各自的目镜成像，它的倍率变化是由改变中间镜组之间的距离而获得，利用双通道光路,双目镜筒中的左右两光束不是平行，而是具有一定的夹角，为左右两眼提供一个具有立体感的图像。它实质上是两个单镜简显微镜并列放置，两个镜筒的光轴构成相当于人们用双目观察一个 物体时所形成的视角，以此形成三维空间的立体视觉图像

四.实验步骤

1.制片并观察(洋葱内表皮细胞) 

2.使用暗视野显微镜观察洋葱内表皮细胞

3.使用相差显微镜、体视显微镜、倒置显微镜观察线虫

五.注意事项

1.正确使用显微镜: 

①取得最佳图像

a.调节瞳距，令视野合二为一

b.左右眼视力不可调近视度

c聚光器数值孔径大小与物镜信数一致

d.聚光器遵循低倍镜调低，高倍镜调高

e.光源亮度遵循低信调低，高倍物镜调高

②使用显微镜的习惯: 

a打开电源后慢慢调亮灯泡，调到最亮后关闭电源

b.观察切片时候从低倍镜到高倍镜切换

c.观察结束后，载物台转至最低

d.用完显微镜，物镜要调成"八字”

e.光源调至最暗后关闭显微镜光源。

③使用故障维修: 

a.载物台下滑调紧调节器

b.图像不清晰，使用乙醚乙醇镜头清洗液擦拭镜头

c看到玻璃片调低聚光器高度。

d.灯源不亮不需要换灯泡

e.成像背景为黄色，在聚光器上放置蓝色滤光片

六.实验结果与讨论心

1.绘制洋葱表皮细胞图(请写出图例，注明放大倍数，并做好标注! )