组织RNA提取（Trizol法）、浓度测定及反转录
一、RNA提取（Trizol法）
1. 取30mg组织放入匀浆管（内置磁珠）中，加入1ml Trizol，用匀浆器进行3次组织匀浆，每次15s。最后检查管内是否还有大的组织块，若有则继续匀浆，直至无肉眼可见的组织块。
2. 最大转速瞬离匀浆管。将溶液吸入到新的EP管中，室温放置5min。
3. 加入0.2ml 氯仿，剧烈混匀，溶液呈现乳状，室温静置5min，4℃ 12000g离心15min。
4. 吸取上层水相于新的EP管中（注意不要吸到中间层，一般1ml Trizol可以吸到400-500ul液体）。加入1.5倍体积的异丙醇（600ul），上下颠倒混匀，室温静置10min，4℃ 12000g离心10min。
5. 弃上清，注意不要弃去RNA白色沉淀，加入1ml 75%乙醇（用DEPC水配）洗涤，上下翻转使RNA沉淀浮起，4℃ 7500g离心5min。
6. 弃上清，注意不要弃去RNA白色沉淀，加入1ml 75%乙醇（用DEPC水配）洗涤，上下翻转使RNA沉淀浮起，EP管按相反方向放入离心机，4℃ 7500g离心5min。
7. 弃上清，注意不要弃去RNA白色沉淀，4℃ 7500g离心1min，200ul枪头吸去残留液体。
8. 室温晾干5-10min。
9. 加入30ul DEPC水溶解RNA。
10. NanoDrop测浓度，放置于-80℃冰箱保存或直接进行反转录。
二、RNA浓度测度及反转录
(试剂盒PrimeScript RT Master Mix ，TAKARA，RR036A)
1. Nanodrop测RNA浓度，用于进行反转录。
2. 体系配制：1000ng RNA，4ul 5× RT Master mix，RNase free water补足到20ul
3. 混匀后放入PCR仪反应，条件如下：37℃, 30min → 85℃, 1min → 4℃, ∞
4．ddH2O将反转录后的cDNA稀释到2.5 ng/ul，-80℃保存。
