【高中生物选必三】微生物的纯培养与计数（知识）|0基础也能学会！

喵喵 | 1-3 微生物的培养（下）

知识点1️⃣：微生物的纯培养

1️⃣微生物的纯培养

（1）纯培养物：由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物。

（2）纯培养：获得纯培养物的过程就是纯培养。

2️⃣纯培养的过程：配制培养基→灭菌→接种→分离→培养

【配制培养基】计算→称量→溶化→调pH→定容→灭菌→倒平板

倒平板的具体操作步骤:

【平板划线法】

是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。

【提问】如果5个区域，接种环应该灼烧几次？

6次【每次开始+做完实验之后】

【稀释涂布平板法】

将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

【培养】将接种后的培养基和一个未接种的培养基（作对照）都倒置放入30-37℃恒温箱中，培养12h和24h，分别观察并记录结果。（酵母菌28℃左右）

【提问】为什么要导致培养？

1️⃣防止水滴掉落冲散杂菌

2️⃣防止污染培养基

【临时保藏】

首先，将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在合适的温度下培养。当菌落长成后，将试管放入4℃的冰箱中保藏。以后每3~6个月，都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上。

【甘油管藏】

在3mL的甘油管中，装入1mL甘油后灭菌，将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混合后，放在-20℃的冷冻箱中保存。

知识点2️⃣：微生物的技术

【活菌间接计数法】用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目

a. 设置重复组，同一稀释度重复对照平板不能少于3个，增强实验说服力及准确性。

b. 选择菌落数在30~300之间适于计数的平板。

c. 该实验每克样品中的菌株数=(C÷V) × M（C代表某一稀释度下平板上的平均菌落数；V代表涂布平板时所有的稀释液的体积；M代表稀释倍数)

d. 设置对照实验，提高实验结果的可信度、e. 统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。

【注意】稀释倍数

细菌：10⁴ 10⁵ 10⁶

放线菌：10³ 10⁴ 10⁵

真菌：10² 10³ 10⁴