微生物复习题

一、选择题

1、微生物是一些个体微小、构造简单的低等生物的总称，它们的大小一般小于（ C ）

A 、1cm B、1mm C、0.1mm D、1μm

2、在微生物学发展史上曾出现过寻找重要病原菌的“黄金时期”，其原因主要是（ C ）

A 、显微镜的应用 B、消毒灭菌术的建立

C 、微生物纯种分离技术的成功 D、纯种微生物培养技术的创立

3、人类已消灭的第一个传染病是（ C ）

A 、麻疹 B、脊髓灰质炎 C、天花 D、水痘

4、微生物五大共性的基础是（ A ）。

A 、体积小，面积大 B、吸收多，转化快 C、生长旺，繁殖快

D 、适应强，易变异 E、分布广，种类多

5、在以下四大类微生物中，只含DNA 或RNA 一种核酸的是（ D ）。

A、真菌 B、真细菌 C、古生菌 D、病毒

6、土壤中三大类群体微生物以数量排序为（ A ）

A 、细菌＞放线菌＞真菌 B、细菌＞真菌＞放线菌

C 、放线菌＞细菌＞真菌 D、真菌＞细菌＞放线菌

7、在以下六类微生物中，细胞壁不含肽聚糖的是（ C ）。

A 、真细菌 B、放线菌 C、古生菌 D、蓝细菌

E 、支原体 F、立克次氏体

8、在G 细菌细胞壁中缺乏的化学成分是（ D ）

A 、肽聚糖 B、磷壁酸 C、类脂质 D、蛋白质

9、在G 细菌细胞壁中缺乏的化学成分是（ B ）

A 、肽聚糖 B、磷壁酸 C、类脂质 D、蛋白质

10、革兰氏染色的关键步骤是（ C ）

A. 结晶紫(初染) B.碘液(媒染) C.酒精(脱色) D.蕃红(复染)

11、多数霉菌细胞壁的主要成分为( B )

A 、纤维素 B、几丁质 C、肽聚糖 D、葡聚糖和甘露聚糖

12、下列微生物能通过细菌滤器的是( C )

A 、细菌 B、酵母菌 C、病毒 D、霉菌 －+

13、在放线菌发育过程中, 吸收水分和营养的为( A )

A 、基质菌丝 B、气生菌丝 C、孢子丝 D、孢子

14、 分生孢子头呈扫帚状的霉菌是（ C ）

A. 毛霉 B. 根霉 C. 青霉 D. 曲霉

15、用溶菌酶水解G 细菌的细胞壁通常可获得一种称为（ D ）的缺壁细菌。

A 、支原体 B、L 型细菌 C、原生质体 D、球状体

16、目前用于解释细胞膜功能的学说，主要是（ B ）

A 、渗透调节皮层膨胀学说 B、液态镶嵌模型

C 、化学渗透学说 D、构象假说

17、异染粒在细菌中的生理功能是（ D ）

A 、碳源贮藏物 B、氮源贮藏物 C、能源贮藏物 D、磷素贮藏物

18、有一种芽孢杆菌可产生具有杀虫作用的伴孢晶体，这种细菌称为（ B ）。

A 、地衣芽孢杆菌 B、苏云金芽孢杆菌 C、蕈状芽孢杆菌 D、凝结芽孢杆菌

19、在以下六类微生物中，不属于真核微生物的是（ D ）

A 、真菌 B、微藻 C、原生动物 D、蓝绿藻 E、地衣

F 、黏菌

20、在固态基质上会不断蔓延，以致不能形成菌落的霉菌是（ D ）。

A 、青霉 B、曲霉 C、白地霉 D、根霉

21、决定病毒感染专一性的物质基础是（ B ）

A 、核酸 B、蛋白质 C、脂类 D、糖类

22、病毒对（ C ）不敏感

A 、高温 B、紫外线 C、抗生素 D、干扰素

23、下列微生物耐温顺序为（ B ）

A. 营养体＞孢子＞芽孢 B.芽孢＞孢子＞营养体

C.孢子＞营养体＞芽孢 D.芽孢＞营养体＞孢子

24、动物病毒在其宿主的单层细胞培养物上所形成的聚集体，称为（ C ）

A 、包含体 B、噬菌斑 C、空斑 D、枯斑

25、在噬菌体一步生长曲线中，若人为地用氯仿等破坏宿主细胞，发现培养液呈现侵染性，

此期称（ C ）。

A 、潜伏期 B、隐晦期 C、胞内累积期 D、裂解期 －

26、噬菌体属于病毒类别中的( A )

A. 微生物病毒 B. 昆虫病毒 C. 植物病毒 D. 动物病毒

27、对多数微生物来说，最适宜的碳源是（ B ）

A 、C ·G ·I ·B ·N 类 B、C ·H ·O 类 C、C ·H 类 D、C ·O 类

28、在C ·H ·O 类化合物中，微生物最适宜的碳源是（ A ）

A 、糖类 B、有机酸类 C、醇类 D、脂类

29、培养真菌时, 培养基常加0.3%乳酸, 其目的是( D )

A. 提供能源 B.提供碳源 C.调节pH D.三者都是

30、微酸环境下适宜生长的微生物是（ C ）

A 、细菌 B、放线菌 C、真菌 D、病毒

31、下列哪种培养法适用于厌氧菌的培养（ D ）

A. 固体平板 B. 固体斜面 C. 液体表面 D. 高层琼脂柱

32、以高糖培养酵母菌, 其培养基类型为( A )

A. 加富培养基 B. 选择培养基 C. 鉴别培养基 D. 普通培养基

33、向培养基中加入青霉素筛选转化子, 此培养基属（ C ）

A. 基础培养基 B.加富培养基 C.选择培养基 D.鉴别培养基

34、蓝细菌属于（ A ）微生物。

A 、光能自养型 B、光能异养型 C、化能自养型

D 、化能异养型

35、葡萄糖和果糖等营养物进入原核生物细胞膜的机制是通过（ D ）

A 、单纯扩散 B、促进扩散 C、主动运送 D、基团移位

36、发酵是以（ D ）作为最终电子受体的生物氧化过程

A.O2 B.CO2 C.无机物 D.有机物

37、高氏1号培养基适合培养（ B ）

A 、细菌 B、放线菌 C、酵母菌 D、霉菌

38、要对含菌量较少的水样进行细菌计数，较好的方法是应用固体培养基中的（

A 、固化培养基 B、非可逆性固化培养基

C 、滤膜固体培养基 D、天然固态培养基

39、要对细菌进行动力观察，最好采用（ C ）

A 、液体培养基 B、固体培养基 C、半固体培养基 ）法。 C

D 、脱水培养基

40、下列哪种结构与细菌的侵袭力无直接关系（ C ）

A. 菌毛 B. 链激酶 C. 细胞膜 D. 荚膜

41、新陈代谢研究中的核心问题是（ C ）。

A 、分解代谢 B、合成代谢 C、能量代谢 D、物质代谢

42、反硝化作用的最终产物( C )

A. NH3 B. HNO3 C. N2 D. HNO2

43、在典型生长曲线中，细胞形态最大的时期是（ A ）。

A. 延滞期 B. 指数期 C. 稳定期 D. 衰亡期

44、在典型生长曲线中，代时最短的时期是（ ）

A. 延滞期 B. 指数期 C. 稳定期 D. 衰亡期

45、质粒是细菌的（ B ）。

A. 核质DNA B. 胞质DNA C. 胞质RNA D. 核质DNA

46、黏质沙雷氏菌在25℃培养时会产生深红色的灵杆菌素，可是，当培养基在37℃下时就不产此色素，但若再降到25℃时又重新恢复产色素能力，此即（D ）

A. 遗传型 B. 表型 C. 变异 D. 饰变

47、今从土壤中分离到一株菌，欲对其进行鉴定，首先应进行的是：（ A ）

A 、获得该菌株的纯培养 B、细胞形态和习性水平研究

C 、查找权威鉴定手册 D、基因或DNA 水平鉴定

48、干热灭菌法要求的温度和时间为（ C ）

A. 105℃,2小时 B. 121℃,30分钟 C. 160℃,2小时 D. 160℃,4小时

49、下列哪种情况不属于微生物与生物间共生关系的体现。（ D ）

A. 根瘤 B. VA菌根

C. 反刍动物的瘤胃 D. 固氮菌与纤维素分解菌的共培养

50、下列微生物耐温顺序为（ B ）

A 、营养体＞孢子＞芽孢 B、芽孢＞孢子＞营养体

C、孢子＞营养体＞芽孢 D、芽孢＞营养体＞孢子

三、填空

1、根据形态、结构等生物学特征，可将微生物划分为 原核微生物 、 真核微生物 、 非细胞型微生物 三大类。

2、专性活细胞内寄生的微生物有 衣原体 、 立克次氏体 、 病毒 。

3、真核微生物的鞭毛为 9+2 型。

4、列出四种观察细菌鞭毛的方法 电镜观察 、 鞭毛染色法 、 悬滴法 、 半固体穿刺法 。

5、测定噬菌体效价的常用方法是 双层平板法 。

6、细菌的特殊结构中，与致病性直接相关的是 菌毛 和 荚膜 。

7、连续培养器的原理按控制方式可分为 恒浊器 和 恒化器 。

8、细菌生长繁殖需要营养 ， 温度 ， pH ， 气体 条件。

9、细菌的6类营养要素包括 碳源 、 氮源 、 能源 、 生长因子 、无机盐 和 水 。

10、营养物质进入细胞的方式有四种，其中可以逆浓度梯度运输营养物质的方式有 主动运输 和 基团转运 。

11、将病毒分为三种对称体制。例如，腺病毒属于 二十面立体 对称体制，TMV 属于 螺旋 对称体制。

12、利用“曲颈瓶试验”否定自然发生学说的是 巴斯德 ，首次分离到衣原体的是我国的微生物学家 汤飞凡 。

13、肽聚糖是细菌细胞壁的特有成分，是由肽和聚糖骨架链组成，而后者是 Ｎ－乙酰胞壁酸 和 Ｎ－乙酰葡糖胺 经 β－１、４糖苷键 连接而成。

14、丝状真菌的结构由孢子和菌丝体组成，其中菌丝按功能分为 营养菌丝 和 气生菌丝 两种。

15、细菌的基本形态包括 球状 ， 杆状 ， 螺形状 三种。

16、采用原生质体融合进行微生物遗传育种时，制备细菌的原生质体常用 青霉素 处理，酵母菌常用 蜗牛酶 处理获得相应的原生质体。

17、根据核酸的形式，病毒可分为 dsRAN 病毒， dsDNA 病毒， -ssRNA病毒 ， +ssRNA病毒， ssDNA病毒 ， 反转录病毒 六种。

18、衣原体的生活史包括 始体 和原体 两个阶段，无繁殖能力的阶段是 原体 。

19、证实核酸是遗传物质的3个经典实验分别是 转化实验、_噬菌体侵染实验和_植物病毒重建实验 。

20、证明基因突变的自发性和不对应性的三个经典实验分别是 变量实验 ， 涂布实验 、 影印实验 。

四、名词解释

1、microorganism ：微生物, 指一大类形体微小、结构简单的低等生物的总称。包括真核细胞型、原核细胞型和非细胞结构三大类微生物。

2、真核微生物：是一大类群具有真核生物特点的微生物，包括菌物界的真菌、属于植物界的显微藻类和属于动物界的原生动物。

3、原核生物：是一大类细胞微小、只有核区的单细胞生物，包括真细菌和古生菌两大类。原核生物和真核生物的主要区别是：原核生物细胞膜无核膜包裹，缺少由单位膜分隔而成的细胞器，核糖体为70S 型。

4、古生菌：又称古细菌，是一类在进化早期就与真细菌和真核生物的远祖相互独立演化的原核生物，主要包括一些与地球早期环境有联系的极端微生物，如嗜热菌、嗜酸菌、嗜盐菌和产甲烷菌等。主要特点为细胞壁无肽聚糖，细胞膜脂由醚键连接，以及与细菌有明显差别的16S rRNA序列等。

5、立克次氏体：是大小介于通常的细菌与病毒之间，在许多方面类似细菌，专性活细胞内寄生的原核微生物。主要特征为：专性寄生于真核细胞内的原核生物；有细胞壁，细胞较大， G-；产能代谢途径不完整；以二分裂方式进行繁殖；需在相应的细胞中进行培养繁殖；对热敏感；对青霉素等抗生素敏感；为斑疹伤寒、恙虫病等疾病的病原体；采用“外斐氏反应”检测病原；通过节肢动物叮咬和排泄物传播给人和其他动物。

6、荚膜：糖被的一种，包裹在细菌细胞壁外、有固定层次的胶黏物，一般成分为多糖，少数为多肽或多糖与多肽的复合物。荚膜具有保护、贮藏、附着和堆积代谢废物等生理功能。

7、糖被：包被于某些细菌细胞壁外的一层厚度不定的胶状物，其成分一般为多糖。因厚度不同等原因，可把糖被分成荚膜、黏液层或菌胶团等。糖被德生理功能是保护细胞、贮藏养料、附着和堆积代谢产物等。

8、 L型细菌：实验室或宿主体内通过自发突变而形成的遗传性稳定的细胞壁缺陷菌株。对渗透压敏感，在固体培养基上形成“油煎蛋”似的小菌落。

9、 鞭毛:某些细菌细胞表面着生的一至数十条长丝状、螺旋形的附属物，具有推动细菌运动功能，为细菌的“运动器官”。

10、水活度：在天然环境中，微生物可实际利用的自由水或游离水的含量，一般用在一定的温度和压力条件下, 溶液的蒸汽压力与同样条件下纯水蒸汽压力之比表示，即：αw =Pw/Pow。。

11、伴孢晶体：少数芽孢杆菌形成芽孢时产生的菱形、方形或不规则碱溶性蛋白质晶体，可

作为生物农药。

12、溶原性细菌：温和噬菌体基因组整合到宿主基因组中去，并随细菌基因组的复制而复制，不能形成子代噬菌体。此时的宿主菌就是溶原性细菌。

13、前噬菌体： 温和噬菌体感染宿主菌后, 其基因整合到宿主染色体上, 随宿主染色体的复制而复制.

14、呼吸：又称好氧呼吸，指葡萄糖等底物按一定途径脱氢后，氢经完整呼吸链的传递，最终被外源分子氧接受并释放水，在此过程中完成氧化磷酸化作用而产生ATP 形式的能量。

15、无氧呼吸：又称厌氧呼吸，一类呼吸链末端的氢受体为外源无机氧化物或有机氧化物的生物氧化，是在无氧条件下进行的、产能效率较低的特殊呼吸。其特点是葡萄糖等底物按常规途径脱氢后，经呼吸链传递氢（或电子），最终由氧化态的无机物（NO 3，SO 4等）或有机物受氢，并完成氧化磷酸化产ATP 功能。

16、发酵：在无氧条件下，底物脱氢后所产生的还原力[H]未经呼吸链而直接交中间产物接受；以实现底物水平磷酸化产能的一类生物氧化反应。

17、LPS ：脂多糖（LPS ）：是位于革兰氏阴性细菌细胞壁最外层的一层较厚的类脂多糖类物质，由类脂A 、核心多糖和O-特异侧链三部分组成。

18、PHB ： 聚β-羟丁酸。是一种存在于某些细菌细胞质内的一类颗粒状物质，具有贮存能源、碳源和降低细胞内渗透压的物质。

19、一步生长曲线：一步生长曲线是指能定量描述烈性噬菌体生长规律的实验曲线。一步生长曲线可分为三个时期：①潜伏期; ②裂解期; ③稳定期

20、菌落形成单位（cfu ）：用平板菌落计数法对活菌进行计数时的一个计数单位，对充分分散、稀释度合适的单细胞微生物来讲，1 cfu 即表示样品中有一个活细胞，但对成团或呈链状、丝状生长的微生物来说，则cfu 并非一个活细胞。

21、生长因子：通常指那些微生物生长所必需而且需要量很小，但微生物自身不能合成的或合成量不足以满足机体生长需要的有机化合物。根据生长因子的化学结构与它们在机体内的生理功能不同，可以将生长因子分为维生素、氨基酸和嘌呤及嘧啶碱基三大类。

22、正常菌群： 在正常人体与外界相通的部位，长期寄居的不同种类和不同数量的微生物。一般对人体无害，与机体相互制约＼相互依存，与机体保持动态平衡的关系。

23、条件致病菌：人体的正常微生物菌群一旦进入非正常聚居部位，或生态结构发生改变而引起人类疾病的微生物。主要包括（1）由于机体的防卫功能减弱2）由于正常菌群寄居部位的改变 (３）不合理使用抗生素等。 -2-

24、消毒：采用一种较温和的理化因素，仅杀死物体表面或内部一部分有害的病原菌，而以被消毒的对象基本无害的措施。

25、巴氏消毒法:用于啤酒、牛奶等不耐热的食品德低温消毒法。主要是消除不耐热的无芽孢的病原体。有低温维持法（63℃ ３０min ）和高温瞬时法（７２℃ １５s ）．

五、简答题

1、科赫定律的内容及其在科学研究中的指导意义。

内容：①在患病的动物体内总能发现特定微生物，而健康的动物体内则没有；

②在动物体外可以纯培养此微生物；

③将该培养物接种到易感动物体内会引起同样的疾病；

④从试验动物及实验室培养物中重新分离得到的微生物应该是同种微生物。

意义：鉴定一种微生物；确定一种新微生物种类。

2、试述细菌细胞壁的结构与功能。

细胞壁细胞壁的主要功能有：①固定细胞外形和提高机械强度；②为细胞的生长、分裂和鞭毛运动所必需。③阻拦酶蛋白和某些抗生素等大分子物质. ④赋予细菌具有特定的抗原性、致病性以及对抗生素和噬菌体的敏感性。

革兰氏阳性细菌细胞壁含90%肽聚糖和10%磷壁酸。革兰氏阳性菌肽聚糖厚，层数多，呈网格状分子交织成的网套覆盖在整个细胞上。肽聚糖分子是由肽与聚糖两部分组成，其中的肽有四肽尾和肽桥两种，聚糖则由N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸相互间隔连接而成，呈长链骨架状。磷壁酸是结合在革兰氏阳性细菌细胞壁上的一种酸性多糖，主要成分为甘油磷酸或核糖醇磷酸。磷壁酸可分为壁磷壁酸和膜磷壁酸。

革兰氏阴性细菌的细胞壁由肽聚糖和外膜。其肽聚糖薄 仅由1~2层，呈网状分子，只形成较为疏稀、机械强度较差的肽聚糖网套没有特殊的肽桥。外膜位于革兰氏阴性细菌细胞壁外层，由脂多糖、磷脂和脂蛋白等若干种蛋白质组成的膜。

3、有关鞭毛运动的机制曾有过“旋转论”和“挥鞭论”的争议。1974年，美国学者M.Silverman 和M.Simon 曾通过“逆向思维”方式创造性地设计了一个巧妙的“拴菌”试验，即设法把单毛菌鞭毛的游离端用相应抗体牢固地“拴”在载玻片上，然后在光镜下观察该细胞的行为，结果发现，该菌只能在载玻片上不断打转而未作伸缩“挥动”。从该试验所提供的事实，你认为细菌是以何种方式运动的？该试验的“逆向思维”逆在哪里？

“拴菌”试验指把单毛菌鞭毛的游离端用相应抗体牢固地”拴”在载玻片上，然后在光镜下观察该细菌的运动，结果发现，该菌只能在载玻片上不断打转而未作伸缩挥动，证明了

细菌的运动是因为鞭毛旋转的结果，而不是鞭毛“挥动”的结果。其创新思维在于“逆向思维“，通过固定鞭毛的游离端，使细菌细胞变成了指示鞭毛运动的指示物，进而在光镜下就可观察鞭毛的作用机制。

4、如何初步判断并进一步验证某一细菌是否长有鞭毛？

初步判断可采用半固体琼脂穿刺培养法和悬滴法（水封片法），进一步验证可采用暗视野显微镜法和鞭毛染色法。

1）半固体培养基穿刺接种法：将欲检查的细菌穿刺接种至牛肉膏蛋白胨半固体直立柱培养基中培养，若细菌有运动能力，就会沿着穿刺线向四周扩散生长，使穿刺线变粗且周缘不整齐。无运动能力的细菌仅能沿穿刺线生长，穿刺线显得纤细浓密和整齐。

2）悬滴法：将菌液滴加在洁净的盖玻片中央，在其四周涂上凡士林，然后将它覆盖在凹玻片上，使菌液对准凹槽中央，直接观察。此法快速、简便。

3）暗视野显微镜法：装暗视野聚光器，调节光源，将1小滴香柏油滴于聚光器头颈顶端平面上，再将样品的水封片置于镜台上，使玻片的下表面与透镜上的香柏油接触，然后观察。

4）鞭毛染色法：染色前用媒染剂处理，让其沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。常用染色方法有银染色法、Leifson 氏染色法、Bailey 氏染色法等。

5、试述划线分离的操作方法。

1）取9ml 无菌平板一套在火焰旁按无菌操作法倒人15-20ml 营养琼脂, 让其冷凝成平板。

2）左手拿上述平板, 右手拿接种环在火焰上灭菌后沾取原始分离物在平板上平行划线三条。

3）将接种环在火焰上灭菌, 左手平板转动大约70度, 用灭菌接种环通过第一次划线的地方作二次划线, 以此类推, 重复操作多次。

6、简述微生物纯种分离方法中的平板表面划线法、平板表面涂布法和琼脂培养基浇注法，并说说它们有何优点。

平板划线法：将混杂在一起的不同种微生物或同种微生物群体中的不同细胞，通过在分区的平板表面上作多次画线稀释，形成较多的独立分布的单个细胞，经培养而繁殖成相互独立的多个单菌落。

浇注平板法：将待分离的试样用生理盐水等稀释液作梯度系列稀释后，取其中一合适稀释度的少量菌悬液加至无菌培养皿中，立即倒入融化的固体培养基，经充分混匀后，置适温下培养，在其表面和内层出现的许多单菌落。该法适合兼性厌氧的细菌和酵母菌分离。

涂布平板法：取少量梯度稀释菌悬液，置于已凝固的无菌平板培养基表面，然后用无菌的涂布玻棒把菌液均匀地涂布在整个平板表面，经培养后，在平板培养基表面会形成多个独立分布的单菌落。该法适合好氧性或有气生菌丝的放线菌和细菌分离。

优点：操作简便、设备简单、分离效果好。

7、某微生物发酵厂的发酵液出现疑似噬菌体感染的异常情况，试设计一简便快速实验证实之。

在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板上涂布接种大肠杆菌，同时接种疑似噬菌体感染的发酵液（提前进行适当稀释），培养后若出现噬菌斑，即证明该发酵液受到噬菌体感染。

8、 何谓病毒？以噬菌体为例，试述病毒的增殖周期。

病毒是超显微的，没有细胞结构的，具有以下特点：①无细胞结构，专性活细胞内寄生；②没有酶或酶系统极不完全，不能进行代谢活动；③个体极小，能通过细菌滤器；④对抗生素不敏感，对干扰素敏感。它们在活细胞外具有一般化学大分子特征，一旦进入宿主细胞又具有生命特征。

病毒增殖周期五个阶段

1、吸附 吸附是病毒感染宿主细胞的前提，具有高度的专一性。在通常情况下，敏感细胞表面具有特异性表面接受部位，可与相应的病毒结合。

2、侵入 病毒侵入的方式 取决于宿主细胞的性质，尤其是它的表面结构。一般来说有三种情况：①整个病毒粒子进入宿主细胞；②核衣壳进入宿主细胞；③只有核酸进入宿主细胞。

3、生物生物合成 包括核酸的复制和蛋白质的合成。首先，噬菌体以其核酸中的遗传信息向宿主细胞发出指令并提供“蓝图”，使宿主细胞的代谢系统按次序地逐一转向合成噬菌体的组分和“部件”，合成所需“原料”可通过宿主细胞原有核酸等的降解、代谢库内的贮存物或从环境中取得。

烈性噬菌体体的增殖方式按核酸类型的不同主要分成三类：即①按早期、次早期和晚期基因的顺序来进行转录、转译和复制的双链DNA 噬菌体的增殖方式；②按“滚环”模型复制单链DNA 的增殖方式；③按“花朵”模式复制A 蛋白（成熟蛋白）、衣壳蛋白和复制酶蛋白的增殖方式。

4、装配 病毒核酸的复制与病毒蛋白质的合成是分开进行的，由分别合成好的核酸与蛋白质组成完整的新的病毒粒子的过程。

5、释放 成熟的病毒粒子从被感染细胞内转移到外界的过程称为病毒释放。病毒的释放是多样的，有的通过破裂，出芽作用或通过细胞之间的接触而扩散。

9、培养基中各营养要素的含量间一般遵循何种规律？其中的原因是什么？

由于微生物细胞内各种成分间的比例是稳定的，因此，设计微生物培养基时，考虑微生物细胞组成元素的比例有重要的意义。培养基中各营养物质之间的浓度配比直接影响微生物的生长繁殖和（或）代谢产物的形成和积累，其中碳氮比（C ／N ）的影响较大。在大多数化能异养微生物的培养基中，除水分外，碳源的含量最高，其次是氮源、大量元素和生长因子，它们之间大体上存在着10倍序列的递减趋势，即：

要素：

含量： H 2O ＞ C 源+能源 ＞ N 源 ＞ P 、S ＞ K 、Mg ＞ 生长因子 (～10-1) (～10-2) (～10-3 ) (～10-4 ) (～10-5 ) (～10-6 )

10、试述革兰氏染色的步骤及机理。

革兰氏染色的步骤： 结晶紫初染、碘液媒染、 95 ％乙醇脱色、红色染料复染 4 步； 革兰氏染色的机制： 革兰氏染色结果的差异主要基于细菌细胞壁的构造和化学组分不同。通过初染和媒染，在细菌细胞膜或原生质体上染上了不溶于水的结晶紫与碘的大分子复合物。

G + 细菌由于细胞壁较厚、肽聚糖含量较高和交联紧密，故用乙醇洗脱时，肽聚糖层网孔会因脱水而明显收缩，再加上的 G + 细菌细胞壁基本上不含类脂，故乙醇处理不能在壁上溶出缝隙，因此，结晶紫与碘复合物仍牢牢阻留在其细胞壁内，使其呈现蓝紫色。

G - 细菌因其细胞壁薄、肽聚糖含量低和交联松散，故遇乙醇后，肽聚糖层网孔不易收缩，加上它的类脂含量高，所以当乙醇将类脂溶解后，在细胞壁上就会出现较大的缝，这样结晶紫与碘的复合物就极易被溶出细胞壁。因此，通过乙醇脱色，细胞又呈现无色。这时，再经番红等红色染料复染，就使 G - 细菌获得了新的颜色 —— 红色，而 G + 细菌则仍呈蓝紫色（实为紫中带红）。

11、什么是溶源菌？它有何特点？如何检出溶源菌？

在染色体组上整合有温和噬菌体并能进行正常生长繁殖的宿主称为溶源菌。 特点：能“收养”温和噬菌体并能与其长期共存，通常不呈现对宿主细胞有害的影响；常以较低频率（10－10）进行自发裂解（能使位于宿主基因组上的整合态前噬菌体从染色体上解离出来），使前噬菌体由整合态转变为细胞内的营养态（脱离宿主核基因组而处于积极复制、合成和装配的状态）；溶源菌对同种或关系密切与的噬菌体具有免疫性（免遭其再侵染指特性）；溶源菌也会失去前噬菌体而复愈为正常菌株。 -3-5

检测某一菌株是否属于溶源菌，可利用溶源菌所携带的前噬菌体的低频裂解性，与其相对应敏感菌株以适当比例混合，然后与琼脂培养基混合后倒平板，经培养后形成特殊菌落（中央有溶源菌的小菌落，四周有透明圈围着）。

12、为什么说土壤是人类最丰富的菌种资源库？如何从中筛选所需要的菌种（以酵母菌为例）？

土壤具备了各种微生物生长发育的优越条件，包括营养、水分、空气、酸碱度、渗透压和温度等，故其中各种微生物的含量极为丰富，尤以细菌、放线菌居多，真菌居中，藻类、原生动物较少。

筛选的一般步骤有：采集菌样——富集培养——纯种分离——性能测定——菌种保藏。

13、试从形态、结构、大小、繁殖方式及生活条件等方面比较放线菌、酵母菌及病毒的异同。 放线菌 酵母菌 病毒

形态比较 多为丝状放射状 多为圆形，卵圆形 球状，丝状，砖头状等 结构比较 菌丝和孢子 单细胞 无细胞结构

大小比较 直径较小（1μm 左右） 直径较大（几μm ） 最小（100nm 左右），

繁殖方式比较 孢子和菌丝 芽殖，裂殖，孢子 复制 生活条件 可人工培养，偏碱性 可人工培养，偏酸性 活细胞或组织培养

14、什么是细菌的生长曲线？生长曲线对微生物发酵生产有何指导意义?

细菌接种到适当的液体培养基后，以时间为横坐标，以菌数为纵坐标，根据不同培养时间时细菌数量的变化，可以作出一条反映细菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线，这种曲线称为生长曲线称为生长曲线。一条典型的生长曲线至少可以分为迟缓期、对数期、稳定期和衰亡期等四个生长时期。

迟缓期：细菌的数量维持恒定。在工业发酵和科研中迟缓期会增加生产周期而产生不利的影响，因此应该采取一定的措施：①通过遗传学方法迟缓期缩短；②利用对数生长期的细胞作为“种子”； ③接种前后培养基组成不要相差太大；④适当扩大接种量等方式缩短迟缓期。对数生长期：细菌数量呈对数增加，细菌生长是平衡生长。对数生长期细菌的代谢活性、酶活性高而稳定，大小比较一致，生活力强，因而它广泛地在生产上用作“种子”和在科研上作为理想的实验材料。稳定生长期：由于营养物质消耗，代谢产物积累和pH 等环境变化，逐步不适宜于细菌生长，细菌分裂增加的数量等于细菌死亡数量。稳定生长期的活细菌数最高并维持稳定。如果及时采取措施，补充营养物质或取走代谢产物或改善培养条件，如对好氧菌进行通气、搅拌或振荡等可以延长稳定生长期，获得更多的菌体物质或代谢产物。衰亡

期：细菌死亡速率逐步增加和活细菌逐步减少。细菌衰老并出现自溶。

15、什么是大肠菌群？检验饮用水的质量时，为什么要选用大肠杆菌群数做为主要指标？我国卫生部门对此有何规定？

大肠菌群指任何可发酵乳糖并产酸产气的G 、杆状、无芽孢、兼性厌氧的肠道杆菌，主要是大肠杆菌和一些产气肠杆菌等。

因为这类细菌是温血动物肠道中的正常菌群，数量极多，用它作指标，可以灵敏地推断该水源是否曾与动物粪便接触以及污染程度如何，由此即可避免直接去计算出数量极少的肠道传染病（霍乱、伤寒、痢疾等）病原体所带来的难题。

我国卫生部门规定的饮用水标准是：1mL 自来水中的细菌总数不可超过100个（37℃，培养24h ），1000mL 自来水中大肠菌群数则不超过3个（37℃，培养48h ）。

16、简述湿热灭菌法效果较干热灭菌法效果好的原因。

1) 湿热灭菌法特点：温度低、时间短、灭菌效果好。

2) 灭菌效果好的原因：

菌体内含水量越高凝固温度越低。

汽冷凝会放出潜热。

饱和水蒸汽穿透力强。

湿热易破坏细胞内蛋白质大分子的稳定性，主要破坏氢键结构。

湿热易破坏细胞内蛋白质大分子的稳定性，主要破坏氢键结构。

17、菌种为何会衰退？ 如何初步判断一个菌种是否衰退？如何防止菌种衰退？如何复壮？

衰退原因：基因自发突变。

具体表现有：原有形态性状变得不典型了，生长速度变慢，代谢产物生产能力下降，致病菌对宿主侵染能力下降，对外界不良条件的抵抗能力下降。

防止菌种衰退：1）控制传代次数；2）创造良好的培养条件；3）利用不易衰退的细胞接种；4）采用有效的菌种保藏方法。

复壮：纯种分离、利用寄主复壮、淘汰衰退的个体。

18、历史上证明核酸是遗传物质的实验有哪几个？图示并说明Lederberg 等的影印平板培养试验，并指出其证明突变自发、随机和不对应性的关键步骤。为什么说影印平板实验使自发突变论者彻底摆脱了“驯养论”者的长期纠缠和责难？

1） 经典转化实验：Griffith 的肺炎链球菌动物转化试验、细菌培养试验、S 菌的无细

胞抽提液试验；Avery 等的S 菌生化组分转化试验。 -

2） 噬菌体感染实验

3） 植物病毒的重建实验

Lederberg 等的影印平板培养试验图示：

Lederberg 等的影印平板培养试验关键步骤：影印

影印平板实验使自发突变论者彻底摆脱了“驯养论”者的长期纠缠和责难的理由：该实验的巧妙设计，使实验中的原始链霉素敏感株在根本未触及链霉素的情况下，就可高效筛选到大量抗链霉素突变株。

19、举例说明微生物与环境间的关系。

1）互生：较松散联合，可以是一方得利，或双方有利。如好氧性自生固氮菌与纤维素分解菌、人肠道中正常菌群与人、工业发酵中的混菌培养。

2）共生：紧密结合在一起，高度发展时，形成特殊共住体，生理上有分工，组织、形态上产生新结构。如地衣、根瘤菌与豆科植物、菌根菌与植物、白蚁肠道中的细菌、瘤胃微生物与反刍动物。

3）寄生：一种生物生活在另一种生物表面或体内，从后者获得营养。如噬菌体与细菌、蛭弧菌与假单胞菌、植物病原微生物、动物病原微生物。

4）拮抗：一种生物产生不利于另一种生物生存的代谢物质或改变环境条件，抑制甚至杀死另一种生物的现象。如泡菜中的乳酸菌和腐败菌、产抗生素微生物和其它微生物。

5）捕食：一种生物直接吞食另一种生物。如原生动物捕食细菌和藻类、捕食性真菌捕食土壤线虫。

20、简述微生物在环境保护中的作用。

1） 环境污染概念；水体的污染——富营养化介绍；

2） 污水的微生物处理：原理，处理方法（完全混合曝气法，生物转盘法）；

3） 固体有机垃圾的微生物处理：原理（利用好氧性高温微生物），处理方法（有机垃圾好

氧生物反应器）；

4） 沼气发酵与环境保护：减少畜禽粪便、植物残体的污染；

5） 微生物可做为环境监测和污染控制中的指示生物：利用艾姆斯试验法检测“三致”物质，

发光细菌检测水质污染程度。