细胞污染，该如何应对？-迪医明生物
对于养细胞的科研工作者，可谓是谈“污”色变，在细胞培养过程中，不论是成手还是新手，都无法避免的遭受过细胞污染的“祸害”，不管是细菌、真菌、黑胶虫还是支原体，一旦招惹上这几个家伙，各个都是来者不善，甚至让您的细胞面临“绝种”的风险。针对细胞培养当中面临的最普遍的问题，作为科研工作者的我们必须清楚认识这些微生物，并通过技术手段判断细胞遭受了哪种污染，准确的对症下药，才能为我们的细胞保驾护航。
1 细菌污染
1.1 细菌污染的鉴别
细菌污染是细胞培养当中最常出现的污染类型，枪头不小心碰到瓶壁、手不小心从培养瓶口处穿过、培养基倒入培养瓶，不经意的一个小动作，都可能会造成细菌污染，以致于实验前功尽弃。
细菌污染在没有爆发或培养体系中含有双抗时，细菌污染较容易被科研工作者忽视，黑点在显微镜下一穿而过，小黑点因为数量少且移动迅速而不易发现。随着细菌在培养体系中的增多或者体系中撤掉双抗以后，细菌可以从镜下明显识别，会呈现黑色条状、棒状、球状，培养基的外观也会发生明显的变化，培养变浑浊，有细沙状沉淀，有时会伴有臭味。
1.2 细菌污染的解决方式
一般的细胞培养体系中，普遍采用双抗或者三抗进行细菌的预防，但这两者存在一定的局限性，比如只能预防，而不能拯救已经细菌污染的细胞。另外，很多科研工作者从事原代的细胞分离和培养工作，在从动物身上取材并分离培养的过程中，极易造成细菌污染，如果只是加入双抗或三抗进行冲洗组织，细菌污染无法避免，造成了珍贵动物组织的浪费。
好物推荐-迪医明（Deeming）细胞污染高效清除剂
Deeming细胞污染高效清除剂，不仅兼具双抗或三抗预防细菌的功效，还可以清除支原体污染，有效消除真菌和细菌的污染，只需1-3天就可显著抑制支原体、真菌、细菌的增殖，本产品经过了上百种细胞的测试和长期的实验验证，完美兼具高效和广谱清除细胞污染物的能力，对细胞生长几乎无影响，最大程度上挽救您的细胞。
2 真菌污染
2.1 真菌污染的鉴别
实验室污染的真菌一般为三类：念珠菌、酵母菌、霉菌，细胞污染真菌通常不易察觉，只有霉菌会逐渐出现细丝团状漂浮物，较容易从外观发觉污染，其他真菌污染不像细菌污染培养基会浑浊，污染后培养液清澈透亮，与未污染的细胞从外观上看无明显变化。在显微镜下比较容易判断污染类型，念珠菌呈卵圆状，在细胞周边生长，酵母菌出芽生殖时有明显的一大一小连体结构，霉菌可观察到菌丝体，菌丝呈丝状、管状、树枝状。
2.2 真菌污染的解决方式
真菌污染由于不容易通过培养基的变化来判断，一般发现时就是已经爆发了，镜下会出现明显团状或黑色丝状污染物，细胞状态明显变差，很难救活。传统的预防真菌污染的方式为培养体系中加入三抗，但是一旦发生真菌污染，三抗对于明显的真菌污染就显得心有余而力不足，此时建议如果是还留存种子的细胞就立刻扔掉，彻底消毒灭菌细胞房和CO2培养箱，扔掉可能被污染的培养基，对用过的实验器材进行灭菌。
好物推荐-迪医明（Deeming）真菌清除剂
真菌清除剂用于防止细胞培养过程中的真菌（包括酵母）污染，还可用于消除细胞培养物中的真菌（含酵母）污染。疗效远超真菌抗生素两性霉素B，对细胞培养过程中的真菌污染，如白色念珠菌、曲霉、酵母有很好的疗效。
真菌清除试剂经过了上百种细胞的测试和长期的实验验证，只需1-3天就可以抑制真菌增长。对细胞基本无害，具有高效、特异性杀灭的特点，最大程度上挽救珍贵的细胞，减少真菌污染带来的损失。
3 黑胶虫污染
3.1 黑胶虫污染的鉴别
“黑胶虫”是一种常见的细胞污染物，与细胞共生，随细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长，对细胞生长不利，严重时导致细胞死亡。目前很多细胞存在被“黑胶虫”污染的现象，对细胞培养及其后续实验造成了极大地影响。“黑胶虫”污染的细胞常见的特性有以下几点：（1）培养基不浑浊，但在显微镜下观察细胞时，细胞周围和培养液中有很多“小黑点”，且随着培养时间的延长“小黑点”逐渐增多，更换培养液或洗涤细胞不能将其去除；（2）“黑胶虫”污染的细胞，营养消耗快，需要频繁更换培养液；（3）“黑胶虫”污染的细胞生长缓慢，细胞状态差，空泡化严重，甚至还可能导致细胞形态的改变。
3.2 黑胶虫污染的解决方式
对于黑胶虫污染的细胞，最为快速有效的处理方式就是采用黑胶虫清除剂对黑胶虫进行清除，同时确保培养体系中的血清必须为无黑胶虫和原虫污染的优质血清。
好物推荐-迪医明（Deeming）黑胶虫清除剂
黑胶虫清除试剂用于清除细胞培养过程中产生的“黑点”，只需1-3天就可以显著抑制“黑点”生长，一周左右即可清除“黑点”。
本产品经过了上百种细胞的测试和长期的实验验证，对细胞生长无明显影响，具有高效、特异性杀灭的特点，可显著清除黑胶虫污染，最大程度上挽救珍贵的细胞。
黑胶虫清除案例
4 支原体污染
4.1 支原体污染的鉴别
支原体直径约为0.1-0.3 μm，具有变形能力，可透过常见过滤膜（0.22-0.45 μm），因此常规的无菌过滤方法不能将其去除，常用的抗生素也对支原体无效。支原体污染是细胞培养领域的一个世界性问题，世界各国细胞系支原体污染的平均比例为30-60%。支原体可通过细胞之间交叉污染，操作人员的口腔、皮肤造成污染，或者血清等添加物而带入污染。
支原体在光学显微镜下不可见，一般不会引起培养物混浊，因此细胞被支原体污染一般难以察觉。支原体会消耗必须氨基酸，影响细胞生长速率，促进代谢物积累，改变细胞形态，影响 DNA、RNA 以及蛋白质的合成，抑制细胞因子表达，改变被污染细胞的基因表达谱，诱导染色体畸变。
好物推荐-迪医明（Deeming）支原体PCR检测试剂盒
支原体PCR检测试剂盒是优选直扩式PCR酶扩增支原体基因组中保守16SrDNA而设计的，不会扩增细菌等其他基因组，兼具特异性和高灵敏性的特点，且本试剂盒检测范围广，可检测：(1)M.Hyorhinis，(2)M.Fermentans，(3)M.Arginini，(4)M. hominis，(5)M. orale，(6)M. salivarium，(7)M.pirum，(8)Acholeplasma Laidlawii，(9)M. agalactiae，(10)M.bovis，(11)M. buccale，(12)M. arthritidis，(13)M. pulmonis等几乎所有常见的污染细胞的支原体(注：M.为Mycoplasma的缩写)。以上13种支原体约占细胞支原体污染的99%以上。绝大多数支原体污染集中于前8种。因此非常适合于与细胞生物学相关的科研实验室及企业的日常支原体检测。
●高广谱性，可检测所有可能含有支原体的样品
●高灵敏度，可检测低至10 copies的支原体
●高特异性，真核生物、细菌的基因组不会被检测
●高保真性，本试剂盒含有阳标和阴标，可有效避免PCR反应假阴性和假阳性
●操作简易，本试剂盒的预混体系包含PCR反应所需试剂
●耗时短，本试剂盒能够在2小时内完成支原体检测
4.2支原体污染的解决方式
好物推荐-迪医明（Deeming）支原体预防剂
支原体预防试剂适合细胞支原体感染的预防，不仅可用于预防环境和体系可能造成的支原体交叉污染，还可应用于防止支原体污染的复发。
本产品经过了上百种细胞的测试和长期的实验验证，只需1-3天就可以显著抑制支原体生长，对细胞生长几乎无影响，完美兼具高效与温和清除细胞污染物的特点，最大程度上挽救您的细胞。
好物推荐-迪医明（Deeming）支原体清除剂（三款）：支原体高效清除剂、支原体清除剂、支原体清除剂plus
支原体清除剂适合支原体污染严重的细胞，不仅可用于细胞株，还可应用于“脆弱”和易变形的细胞，如各类原代细胞、干细胞、上皮样细胞系，不仅可以显著清除支原体污染，还具有消除细菌污染的能力。
支原体清除剂有三种，分别是支原体清除剂、支原体高效清除剂、支原体清除剂plus。
支原体温和清除剂：温和、高效清除支原体，对细胞生长几乎无影响，完美覆盖所有细胞类型。
支原体清除剂：适合支原体污染非常严重，产生较强耐药性的细胞支原体清除。
支原体清除剂plus：适用于支原体污染非常严重、有极强耐药性且污染多种支原体的情况，此情况较为少见。
本产品经过了上百种细胞的测试和长期的实验验证，只需1-3天就可以显著抑制支原体生长， 2周左右即可清除支原体污染，完美兼具快速和高效清除细胞污染物的特点，最大程度上挽救您的细胞。
支原体清除案例
如上图1所示，左侧为支原体污染的MCF-7细胞，右侧为支原体清除后的MCF-7细胞，倒置显微镜下可明显看出细胞间隙间黑点明显减少，细胞边缘清晰，状态良好。
如上图2所示，左侧为支原体污染的Hep G2细胞，右侧为支原体清除试剂处理的Hep G2细胞。左侧有支原体污染的细胞样品可以观察到细胞核周围微粒状或丝状蓝色荧光。支原体污染严重的细胞可以观察到大量微粒状或丝状蓝色荧光。右侧细胞支原体污染被清除干净，仅观察到细胞核的蓝色荧光，证明支原体已被清除干净。
细胞污染不易察觉，却是关乎我们实验成败的大事，越是需要我们日常的认真对待，相信以上对于细胞房常见污染物的鉴别和解决方案的制定，能帮助我们科研工作者解决细胞最重要的问题，如果您还是未找到问题所在，欢迎您登录迪医明官网，我们期待着为您解答。
