DiD perchlorate；红色细胞膜荧光探针

DiD perchlorate 是一种发出远红色荧光的亲脂性羰花青，广泛用作亲脂性示踪剂。 它在水中发出弱荧光，但当掺入膜中时发出强荧光。 它在脂质环境中具有极高的消光系数和短的激发态寿命（~1 纳秒）。 一旦应用于细胞，染料就会在质膜内横向扩散。

图1.DiD perchlorate化学结构

DiD操作说明（仅供参考） 
1.染色液制备
（1）储存液制备：用 DMSO或EtOH配置浓度1～5 mM。
【注】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融。
（2）工作液制备：用合适的缓冲液稀释储存液，配制浓度为1～5 μM的工作液。
【注】工作液浓度根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的10倍范围内开始最优浓度的摸索。
2.悬浮细胞染色
（1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。
（2）37 ℃孵育细胞 2～20min，（不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果）

（3）孵育结束后，1000～1500 rpm离心5min。
（4）倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。
（5）重复（3），（4）步骤两次以上。
3. 贴壁细胞的染色
（1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。
（3）在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
（4）37 ℃孵育细胞 2～20min，（不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果）

（5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸干培养基。

图2.DiD perchlorate染色细胞