【干货】8-异前列腺素检测ELISA试剂盒实用操作步骤

8-异前列腺素是前列腺素的一种异构体，能广泛的应用于临床医疗它是一种有效地肾脏和肺的血管收缩剂，可以指示肝肾综合症或者肺的氧化毒性，同时，它还以作为抗氧化缺陷的标记；它还存在于血清，血浆和整个细胞周边环境.正常人8-异前列腺素的含量为40-100pg/ml.

开曼生物8-异前列腺素检测Elisa试剂盒，是基于竞争反应，经乙酰胆碱酯酶示踪的8-异前列腺素与游离的8-异前列腺素相互竞争其与兔抗血清中有限的结合位点的原理来定量样本中8-异前列腺素的含量.

艾美捷 8-异前列腺素检测Elisa试剂盒特点：

该试剂盒是根据免疫竞争的原理简单稳定的定量血液，尿液和其他生物样本中的8-异前列腺素，其灵敏度为10pg/ml,最低检测J限为2.7pg/ml.稳定期为一年，保存于-20.

异烷是非酶源的二十烷酸家族，由组织磷脂被氧自由基随机氧化产生。异前列腺素在组织和血浆样品中以人工制品的形式出现，在长期或不适当的储存过程中经历了氧化降解。在正常情况下，它们也出现在血浆和尿液中，并因氧化应激而升高。

至少一种异前列腺素，8-异前列腺素（8-异前列腺素F2α），已被证明具有生物活性。它是一种有效的肺和肾血管收缩剂，并被认为是肝肾综合征和肺氧中毒的致病介质。2 8-异前列腺素被认为是抗氧化剂缺乏和氧化应激的标志物，在重度吸烟者中发现水平升高。8-异前列腺素水平也是含脂样品（如血清、血浆和全细胞制剂）样品完整性的相对指标。健康志愿者血浆中含有适量的8-异前列腺素，随着受试者年龄的增长而增加。正常人尿中8-异前列腺素的浓度可能比许多酶衍生的类二十烷酸高一个数量级。

本试验基于8-异前列腺素和8-异前列腺素乙酰胆碱酯酶（AChE）结合物（8-异前列腺素示踪剂）之间的竞争，以获得数量有限的8-异前列腺素特异性兔抗血清结合位点。由于8-异前列腺素示踪剂的浓度在8-异前列腺素的浓度变化时保持恒定，因此能够结合兔抗血清的8-异前列腺素示踪剂的量将与孔中8-异前列腺素的浓度成反比。该兔抗血清-8-异前列腺素（游离或示踪）复合物与先前连接到该孔的兔IgG小鼠单克隆抗体结合。清洗培养皿以去除任何未结合的试剂，然后将Ellman试剂（含有要进行乙酰胆碱酯酶的底物）添加到培养皿中。这种酶促反应的产物具有明显的黄色，并在412nm处强烈吸收。分光光度法测定的该颜色强度与结合到该孔的8-异丙醇烷示踪剂的量成正比，该示踪剂的量与孵育期间孔中存在的游离8-异丙醇烷的量成反比。

一般预防措施：

•分析前，所有样品必须不含有机溶剂。

•AEBSF（Pefabloc SC®）和PMSF抑制乙酰胆碱酯酶。本试验中不应使用含有这些蛋白酶抑制剂的样品。

•采集后应立即对样品进行分析；不能立即进行分析的样品应在-80°C下，在0.005%BHT（每1ml样品10μl 5 mg/ml乙醇溶液）的存在下储存。在-20°C下储存不足以防止8-异丙醇的氧化形成。9 BHT在水中的溶解度有限。当BHT添加到水溶液中时，可能会形成沉淀。

•兔源性样品可能含有通过结合小鼠抗兔IgG涂层板干扰分析的抗体。我们建议在本试验中使用之前对所有兔子样品进行纯化。

干扰测试：

通常，组织培养上清液样品可使用Elisa缓冲液稀释，并直接添加到分析孔中。血浆、血清、尿液以及其他非均质混合物（如灌洗液和抽吸物）通常含有可干扰分析的污染物。在进行大量样本测量之前，最好先检查是否存在干扰。为了测试干扰，稀释一个或两个试样，以获得每个试样至少两种不同的稀释度，介于~5和100 pg/ml之间（即20-80%B/B0）。如果样品的两种不同稀释液在最终计算的8-异丙醇浓度中显示出良好的相关性（相差20%或更小），则不需要纯化。若你们看不到不同稀释液的良好相关性，建议进行纯化。

灌洗液和抽吸物：

某些灌洗液可能未经净化就进行分析。不能立即进行分析的样品应在-80°C条件下，在0.005%BHT的存在下储存（见第13页的一般预防措施）。一定要在与样品相同的介质中稀释标准溶液。注意：如果您获得不一致的结果，SPE或免疫亲和纯化是有保证的。

尿：

一般来说，尿液样本可以用Elisa缓冲液稀释，并直接添加到微孔中。不能立即进行分析的样品应在-80°C条件下，在0.005%BHT的存在下储存（见第13页的一般预防措施）。注意：如果您获得不一致的结果，SPE或免疫亲和纯化是有保证的。