快速内切酶EagI/C-BSM535方案

FlyCut™ 酶是一系列能够快速消化DNA的工程限制性酶。所有FlyCut™酶在通用CutOne中显示出优异的活性™ 和CutOne™ 彩色缓冲液，能够在5~15分钟内消化DNA。这使得任何限制性酶的组合都能在一个反应管中同时工作，并消除了连续消化的需要。FlyCut™ 酶已通过多项严格的质量控制，可用于消化质粒、基因组和病毒DNA以及PCR产物。CutOne™ Color Buffer包括密度试剂以及红色和黄色跟踪染料，可以将反应混合物直接装载在凝胶上。CutOne的红色染料™ 彩色缓冲液在1%琼脂糖凝胶中与2.5kb的双链DNA片段迁移，黄色染料在1%琼脂凝胶中与10bp的双链脱氧核糖核酸片段迁移。

 

艾美捷快速内切酶EagI：

Cat #: C-BSM535

Size: 25 rxns

Storage: -20°C

 

快速内切酶EagI组分：

推荐反应条件

1xCutOne“缓冲液；在37°C下培养；有关反应设置，请参阅“快速DNA消化方案”。

热灭活

在80°C下培养20分钟。

质量控制

功能测试

在含有1μgλDNA（Hindll消化物）和1μl FlyCut“”Eagle的CutOne“”缓冲液中，在37℃下孵育15分钟，反应20μl，琼脂糖凝胶电泳测定完全消化。

长时间培养/星形活性测定

在含有1μgλDNA（Hindlll消化物）和1μl FlyCut’Eagle的CutOne“缓冲液中，在37℃下孵育3小时，反应20μl，通过琼脂糖凝胶电泳测定，产生无可检测核酸酶降解的DNA模式。较长的孵育时间可能导致星形活性。

结扎和清算

在37°C下用FlyCut“”Eagle消化10倍后，>95%的DNA片段可以与22°C的T4 DNA配体连接。在这些连接的片段中，通过琼脂糖凝胶电泳测定，>95%可以用FlyCut“”Eagle重新切割。

非特异性核酸内切酶活性

在含有1μg超螺旋质粒和1μl FlyCut“”Eagle的CutOne“”缓冲液中，在37°C下孵育4小时，20μl反应可使琼脂糖凝胶电泳测定的镍或线性形式的转化率<10%。

 

蓝/白筛选试验

用1μl FlyCut消化含有lacZα基因的合适载体™ 伊格。将消化产物连接并转化为大肠杆菌感受态细胞。在含有X-Gal、IPTG和适当抗生素的Luria Bertani培养板上，成功连接的β-半乳糖苷酶基因可以表达并产生蓝色菌落，而中断基因（即降解的DNA末端）产生白色菌落。FlyCut™ 限制性内切酶必须产生少于1%的白色菌落。

 

在推荐的反应条件下，该酶可在5~15分钟内消化单位底物。酶的最适反应温度为37°C。

当底物DNA被CpG甲基化酶甲基化时，这种限制性酶的切割可能被阻断或受损。

该酶在80°C下保温20分钟即可热灭活，保温3小时不显示星形活性，但保温时间较长可能会产生星形活性。