Graves 病动物模型【实验代做】

Graves 病动物模型【实验代做】

【造模机制】Graves 病又称毒性弥漫性甲状腺肿或 Basedow 病,是一种器官特异性自身免疫性疾病,在环境与遗传因素的相互作用下,机体免疫系统产生了针对促甲状服散变体(TSHR)的抗体(TRAb)、TRAb 中的甲状腺刺激抗体(TSAb)可模拟 TSH 功能,导致甲状腺激素过度分泌,血中 T 和 T升高。

TSHR是一种糖蛋白激素受体,其经分子内裂解脱去C肽后,形成位于细胞表面的A亚单位及穿膜召亚单位,与配体(TSH 和TRAb)结合的是A亚单位,而非全长TSHR。有研究者证实 TSAb优先识别的是 TSHR A 亚单位,本模型的造模机制即用表达 TSH受体A亚单位的重组腺病毒免疫小鼠,诱导产生TRAb,从而导致 Graves病(GD)的发生。

【造模方法】选用清洁级 BALB/c小鼠,雌性,8~8 周龄,体重 23～~28g,动物饲养于解障环境中。取已构建好的表达 TSH受体 A 亚单位(TSFR289)的重组腺病毒,对照腺病器(Ad-mul)各15×10'U,分別用 PBS 稀释至 50μl直接经胫前肌注射小鼠,每隔 3周免疫1次,共3次。于第3 次免疫后8 周摘眼球取血,检测血清 TRAb,TT,、TSH;剥离甲状腺,做组织学检查;每隔 2 周记录一次小鼠体重,观察体重变化。

【模型特点】

1.经 Ad-TSHR289 免疫的小鼠有 50%表现 TRAb 水平显著升高,21.4%表现血清TT水平明显升高。 TT 升高的小鼠 TRAb 水平均显著升高,伴有血清 TSH 降低,并有不同程度的体重减轻。

2.甲状腺组织病理切片显示正常小鼠甲状腺滤泡大小较一致,细胞排列比较疏松,上皮细胞呈低立方状或扁平状,滤泡中胶质含量比较丰富。经 Ad-TSHR289 免疫的小鼠有28.6％表现甲状腺滤泡细胞增生肥大,呈立方状或高柱状,滤泡大小不一,滤泡腔中胶质含量减少,在增生的甲状腺滤泡中有乳头状折叠突人滤泡腔,未见淋巴细胞浸润。其中TT,升高的小鼠增生尤为明显,提示高分泌活性。

【应用范围】本模型利用表达 TSHR289 的重组腺病毒免疫 BALB/c 小鼠,制备了Graves 病动物模型,为 Graves 病的发病机制、治疗等进一步研究提供了工具。

【注意事项】研究表明不同的免疫方法和注射途径可产生不同的效果,用表达 TSHRA 亚单位的腺病毒免疫 BALB/c 小鼠,其引起 GD 的发生率更高。

本模型动物 TRAb 升高水平显著高于人类 GD,而在 Chen 等的研究中显示用较弱的抗原刺激将会降低 TRAb 的滴度,并能改变 TSAb 和甲状腺刺激阻断型抗体(TSBAb)的平衡,使动物模型特征更接近典型的 GD,故用较低剂量的含目的基因的重组腺病毒免疫将会进一步优化 GD 动物模型的制备。

【模型评估】目前,在建立 GD 动物模型的探索中,TSHR-腺病毒尤其是 TSHR A 亚单位-腺病毒免疫小鼠的 GD 发生率高且较稳定,是近来采用较多的方法。

本实验诱导的 GD 动物模型表现 TRAb 阳性,伴有血清甲状腺激素水平升高、TSH水平降低,并出现体重减轻,表明模型在一定程度上模拟了人类 GD,但该模型缺乏人类 GD 常有的眼病表现。

把人类的 TSAb 基因转人小鼠的受精卵中,培育出 TSAb 转基因小鼠。该转基因组小鼠表现血清 FT、升高、TSH 水平下降,伴有基础体温升高、体重下降、吸碘率升高和甲状腺组织增生表现。转基因模型可进行传代,避免了研究过程中需反复构建模型的麻烦,是一个全新的方向。

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