一、概念

    免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP)是研究蛋白质——蛋白质相互作用的常用技术。

    通常用于测定两种已知蛋白质能否在细胞内结合并产生相互作用，以及用于确定与某种特定蛋白质具有相互作用的未知蛋白质。

该法的优点：

    蛋白质处于天然状态，蛋白质的相互作用可以在天然状态下进行，可以分离得到天然状态下相互作用的蛋白质复合体。

【附：以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法，是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。（简易概念）】

详细概念：

    免疫共沉淀就是利用——抗原（X）与蛋白（Y)先结合，再通过X的抗体沉淀X，随后利用精制的prorein预先结合到磁珠上，使得它能与抗原的溶液及其抗体反应后磁珠上的prorein就能吸附抗原，获得复合体（X+Y)，然后就可以对Y（蛋白）进行检测，从而获得蛋白质与蛋白质相互作用的信息。

二、注意事项：

1. 抗原没有免疫沉淀下来：

①样品中抗原含量太少，不足以能被检测，通过WB验证裂解液中蛋白的表达及裂解效率；如果需要，请加大样品量

②抗体无法结合抗原，使用新生产的特异性抗体，或者选择另一种识别不同抗原表位的抗体

③modified RIPA Buffer（改良的RIPA缓冲液）中的成分干扰抗体抗原的结合，尝试更换其他裂解液。

2. 洗脱下的抗体条带掩盖了目标抗原：

抗原的分子量大约是50kDa或25kDa，WB实验选择使用与免疫共沉淀体不同种属的抗体。

3. 获得蛋白量低：

①蛋白降解，加入蛋白酶抑制剂。

②所用beads量不够，加大免疫复合物使用的beads量。

③样品中目标蛋白量不够，提高样品量。

④ 多条非特异性条带：

有非特异性的蛋白结合在beads上，可以尝试提高modified RIPA Buffer（改良的RIPA缓冲液）中NaCl浓度。

5. beads聚集：未按步骤预洗beads

三、实验关键：

1、实验最中最需要注意的是抗体的性质，特别是多抗的特异性

2、要考虑到抗体和缓冲液的比例，抗体过少就会不能检出抗原，缓冲液太少则会容易出现假阳性，缓冲液过多会出现抗原被稀释现象

3、确定蛋白间的相互作用发生在细胞中，不是由于细胞的容易才发生的，这需要进行蛋白质的定位来确定

4、 为防止蛋白降解、修饰改变、溶解抗原，缓冲液必须加蛋白酶抑制剂，在低温下进行实验