土壤有效硼的测定前处理仪器：高温冷凝回流提取仪
①方法选择的依据：土壤中的硼可分成水溶性硼、酸溶性硼和难溶性硼。全硼含量一般不宜用来判断土壤对植物供应硼的能力。土壤有效硼用沸水浸出后，常用比色法测定。比色测定硼的显色剂很多，以姜黄素应用得最为广泛。姜黄素与硼的显色在水溶液蒸干过程中进行；而四羟基葸醌、胭脂红酸、1，1′日二葸醌亚胺等试剂则只能在浓H2SO4中显色，试剂溶液的配制、贮存和比色操作都十分不便，对玻璃器皿也有较高的要求。姜黄素法避免了这些缺点，灵敏度也较高，适用于土壤和植物中硼的测定。
②方法要点：土样经沸水浸提5分钟，浸出液中的硼用姜黄素比色法测定。姜黄素是由姜中提取的黄色色素，以酮型和烯醇型存在，姜黄素不溶于水，但能溶于甲醇、酒精、丙酮和冰醋酸中而呈黄色。在酸性介质中与B结合成玫瑰红色的络合物，即玫瑰花青苷。它是两个姜黄素分子和一个B原子络合而成，检出B的灵敏度是所有比色测定硼的试剂中最高的（摩尔吸收系数3=1.80×155），最大吸收峰在550nm处，在比色测定B时应严格控制显色条件，以保证玫瑰花青苷的形成。
玫瑰花青苷溶液在0.0014～0.06ppmB的浓度范围内符合Beer定律。溶于酒精后，在室温下1～2小时内稳定
③主要仪器：石英（或其他无硼玻璃）；三角瓶（250或300ml）和容量瓶（100ml，1000ml）；回流装置；离心机；瓷蒸发皿（Ф7.5cm）；恒温水槽；分光光度计。
④试剂：95％酒精（二级）；无水酒精（二级）；姜黄素——草酸溶液：0.04g姜黄素和5g草酸（H2C2O4·2H2O二级）溶于无水酒精中，加入4.2m16NHCl，移入100ml石英容量瓶中，用酒精定容，贮存在阴凉处。姜黄素容易分解，最好当天配制。如放在冰箱中，有效期可延长至3～4天。
B标准系列溶液：0.5716gH3BO3（一级）溶于水，在石英容量瓶中定容成1升，此为100ppmB标准溶液。再稀释10倍成为10ppmB标准贮备溶液。吸取10ppmB溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml，用水定容50ml，成为0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ppmB的标准系列溶液，贮存在塑料试剂瓶中。
INCaCl2溶液：7.4g CaCl·2H2O（二级）溶于100ml水中。
⑤操作步骤：待测液制备称取风干土壤（通过1mm尼龙筛）10.00g到250ml或300ml的石英三角瓶中，加20.0ml无硼水。连接回流冷凝器后煮沸5分钟整，立即停火，但继续使冷却水流动。稍冷后取下石英三角瓶，放置片刻使之冷却，倒入离心管中，加2滴INCaCl2溶液以加速澄清（但不要多加），离心分离出清液。
测定吸取1.00ml清液（含硼不超过lug），放入瓷蒸发皿中，加入4ml姜黄素溶液。在55±3℃水浴上蒸发至干并且继续在水浴上烘干15分钟除去残存的水分。在蒸发与烘干过程中显出红色。加20.0m195％酒精溶解，用于滤纸过滤到1cm直径比色槽中，在550nm波长处比色，用酒精调节比色计的O点。假若吸收值过大，说明B浓度过高，应加95％酒精稀释或改用580或600nm的波长比色。
工作曲线的绘制分别吸取0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ppmB标准系列溶液各1ml，放入瓷蒸发皿中，加4ml姜黄素溶液，按上述步骤显色和比色。以B标准系列的浓度（ppm）对吸收值绘制工作曲线。
⑥结果计算：
有效B，ppm=C×液土比
式中C—由工作曲线查得B的ppm数；
液土比—浸提时，浸提剂毫升数/土壤克数=2。
注释：
①用本法测定B时，应严格控制显色条件。姜黄素与B络合形成玫瑰花青苷，需要在无水条件下进行。有水残存会使络合物颜色强度降低。显色时的蒸发条件如蒸发时的温度、蒸发速度和空气流动速度等都必须保持一致，否则再现性不良。所用的瓷蒸发皿要经过挑选，以保证其形状、大小、厚薄尽可能一致。恒温水浴应尽可能采用水层较深的水浴，并且完全敞开，将瓷蒸发皿直接漂浮在水面上。水浴的水面应尽可能高，使蒸发皿不致被水浴的四壁挡住而影响空气的流动，以保证蒸发速度的一致。蒸发至干后继续在同一温度下保持15分钟，使脱水完全。蒸发和脱水时的常用温度是55℃±3℃，温度更高时，可能导致B的损失。
②硬质玻璃中常含有硼，所使用的玻璃器皿不应与试样溶液作长时间接触。加热浸提土壤水溶性硼时，最好使用石英玻璃制的三角瓶。用其他玻璃的制品时，应先进行空白试验，观察空白值的大小，决定其是否能用。用扣除空白的方法来消除玻璃器皿的污染有时是难于奏效的。在加热温度不高时，瓷器皿可用于B的测定。聚四氟乙烯制品是适用的。
③配制试剂及浸提用的水均须用石英蒸馏器重蒸馏过的水或用去离子水。
④若NO-3浓度超过20ppm，对B的比色测定有干扰，必须加Ca（OH）2使呈碱性反应，在水浴上蒸发至干，再慢慢灼烧以破坏硝酸盐。再用一定量的0.1NHCl溶解残渣。吸取1.00ml溶液进行比色测定硼。
⑤若土壤中的水溶性硼含量过低，比色发生困难，可以准确吸取较多的溶液，移入蒸发皿中，加少许饱和Ca（OH）2溶液使之呈碱性反应，在水浴上蒸发至干。加入适当体积（例如5.00ml）的0.1NHCl溶解，吸取1.00ml进行比色。由于待测溶液的酸度对显色有很大影响，所以标准系列也应按同样步骤处理。
⑥蒸发显色以后，应将蒸发皿从水浴中取出擦干，随即放入干燥器内，待比色时再随时取出。蒸发皿不应长时间暴露在空气中，以免玫瑰花青苷因吸收空气中的水分而发生水解，使测定结果不准确。
⑦显色测定过程中，最好不要中途停顿。如因故必须暂停工作，应在加入姜黄素以前暂停，而不要在加入姜黄素以后，否则会使结果不准确。
⑧比色过程中，由于乙醇的蒸发损失，体积缩小，使溶液的吸收值发生改变，故比色工作应尽可能迅速。比色时用酒精作参比，调整比色计吸收值的零点。
