绪论

1、微生物：体积微小、结构简单、直接用肉眼看不到，必须借用光学显微镜或电子显微镜才能看见的微小生物的总称。

分类：三型八类

1）原核细胞型微生物：仅有染色质组成的拟核，无核膜核仁，细胞器只有核糖体。至今未发现古细菌对人有致病性。真细菌包括立克次体、衣原体、支原体、细菌、放线菌、螺旋体。

2）真核细胞型微生物：有核膜核仁和多种细胞器，进行有丝分裂。包括真菌、藻类、原生生物。

3）非细胞型微生物：无细胞结构，仅由蛋白质和一种核酸（DNA或RNA）构成，必须在活细胞内增殖。包括病毒、类病毒。

2、医学微生物的研究内容：三性两法

病原微生物的生物学性状、致病性、免疫性、微生物学检查法、特异性防治原则。

3、郭霍法则：确定某种细菌引起特定传染病的验证标准

①在可疑病例中发现并分离出同一种病原菌

②细菌能在体外获得纯培养并能传代

③将这种细菌纯培养物接种易感动物能引起相同疾病

④从实验感染动物体内能重新分离出同种细菌。

细菌的形态与结构

用革兰氏染色法将细菌分为G+和G-。

一、细菌的大小和形态

观察细菌最常用光学显微镜，um作单位。

按形态分为球菌、杆菌、螺形菌。

绝大多数细菌黏附在无生命或有生命物体表面，以生物被膜形式存在。

1、球菌

双球菌：脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌

链球菌：A群链球菌

葡萄球菌：金葡菌

四联球菌、八叠球菌

2、杆菌

致病菌中最大的G+杆菌是炭疽芽胞杆菌。

大多数杆菌两端钝圆，少数平齐似竹节（炭疽芽胞杆菌），少数尖细（梭杆菌），有的末端膨大（白喉棒状杆菌），有的呈分支生长趋势（结核分枝杆菌）

3、螺形菌

弧菌（霍乱弧菌、副溶血性弧菌）、螺菌、螺杆菌（细长弯曲呈弧形、螺旋形。幽门螺杆菌）

二、细菌的结构

基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、拟核

特殊结构：鞭毛、菌毛、芽胞、荚膜

  细胞壁

G+、G-均有肽聚糖。

1、肽聚糖：细菌细胞壁的主要成分，原核细胞特有。

G+的肽聚糖由聚糖骨架（β-1，4糖苷键连接）、四肽侧链、五肽交联桥，而G-缺乏五肽交联桥。

DAP（二氨基庚二酸仅存在于原核细胞）

2、G+细胞壁

细胞壁较厚，15~50层肽聚糖，磷壁酸特有，分为壁磷壁酸、膜/脂磷壁酸（带负电荷），前者一端连接至肽聚糖的胞壁酸，一端游离；后者一端连接至细胞膜，一端游离。磷壁酸具有抗原性、黏附素活性。还有少量特殊蛋白（金葡菌的SPA、A群链球菌的M蛋白）。

3、G-细胞壁

细胞壁较薄，结构复杂，外膜特有，占细胞壁干重的80%。

外膜由脂蛋白、不对称脂质双层、脂多糖（LPS）组成。

LPS即G-的内毒素由脂质A（内毒素毒性和活性成分，无种属特异性，故不同G-内毒素毒性均相似）、核心多糖（属特异）、特异多糖（最外层，种特异，即O抗原，其丢失菌落由S—R）组成。

Ø  脑膜炎、淋病奈瑟菌有脂寡糖——免疫逃逸

G-细胞膜、外膜间有一周浆间隙，含多种水解酶和侵袭酶（胶原酶、透明质酸酶、β、内酰胺酶）

分枝杆菌细胞壁含有大量脂质。

4、细胞壁的作用：

保护细菌、维持细菌形态；物质交换；致病性；耐药性；静电性（磷壁酸、LPS均带负电荷，但G+带负电荷更多，等电点更低，更易被带正电荷的碱性染料结晶紫染成紫色）；磷壁酸与血清型分类有关。

5、L型细菌（没有细胞壁但再高渗下仍能存活）

G+——原生质体

G-——原生质球

支原体天然缺乏细胞壁，不同于诱导产生（溶菌酶、青霉素）的L型细菌。

高度多形性，无论原先是G+、G-，形成L型均染成阴性。高渗低琼脂含血清培养基。

生长缓慢，荷包蛋样细小菌落。去除诱导因素有的L型可恢复，有的不可以，取决于L型是否残存有肽聚糖作为合成细胞壁的引物。

引起慢性感染（尿路感染、骨髓炎、心内膜炎）且作用于细胞壁的药物对其无效。

溶菌酶作用于β-1，4糖苷键，破坏聚糖骨架。

青霉素竞争转肽酶（青霉素结合蛋白PBP），阻止四肽侧链和五肽交联桥的交联。

G+形成的L型必须保存在高渗环境，G-形成的对低渗有一定抵抗力。

  细胞膜：磷脂、蛋白质，无胆固醇。

物质转运

呼吸与分泌（类似真核细胞的线粒体）

生物合成

参与细菌二分裂：细胞膜内陷形成中介体（多见于G+），类似真核细胞纺锤丝、线粒体，亦称拟线粒体。

  细胞质

1、细菌核糖体：70S——50S和30S

人核糖体是80S（60S、40S）

2、质粒：细菌拟核外能独立自主复制、赋予细菌一定生物学性状（耐药性、细菌素、毒素、菌毛）的闭合环形双链DNA。

质粒不是细菌生长必需。

3、胞质颗粒：大多是贮存的营养物质（不恒定存在），亚甲蓝染色呈紫色——异染颗粒（见于白喉棒状杆菌的两端，也称极体，有鉴定意义）

4、拟核、核质、细菌的染色体：细菌基因组DNA聚集于细胞质的某一区域（多是中央）。

单倍体

  荚膜：去除不影响细菌生命活动。凡黏液性物质牢固地与细胞壁结合，厚度≥0.2um，边界明显者均是荚膜（大荚膜），如肺炎链球菌。厚度＜0.2um者称微荚膜（伤寒沙门菌的Vi抗原、大肠埃希菌的K抗原）。是重要的毒力因子，也有助于细菌的鉴别（荚膜肿胀反应）。

1、大多数细菌荚膜是多糖，但炭疽芽胞杆菌、鼠疫耶尔森菌荚膜是多肽。

2、荚膜不易着色，常用墨汁负染。

3、在动物体内或含糖、血清的培养基易形成荚膜，在普通培养基或连续传代易消失。

4、有荚膜：M型/S型，失去荚膜：R型。

5、荚膜的作用：抗吞噬、抗有害物质损伤、黏附作用。

  鞭毛（所有弧菌、螺菌，半数杆菌和个别球菌）

1、细菌的“运动器官“    特殊染色可在光学显微镜看到。

2、单毛——霍乱弧菌

周毛——伤寒沙门菌

3、有高度抗原性（H抗原）

4、鞭毛的作用：细菌的运动、致病性、细菌的鉴定与分类（O、H分类）

  菌毛（主要是G-和少数G+）

有抗原性，与致病性有关。电子显微镜才能看到菌毛。

1）普通菌毛：遍布，黏附结构，结合宿主细胞表面特异受体——细菌感染的第一步。

2）性菌毛/F菌毛：仅见于少数G-，1~4根。由致育因子（F质粒）编码

接合

  芽胞：细菌的休眠形式，仅见于G+。芽胞杆菌属（炭疽芽胞杆菌）和梭菌属（破伤风梭菌、肉毒梭菌、产气荚膜梭菌）是产生芽胞的主要细菌。

炭疽芽胞杆菌——有氧

破伤风梭菌——缺氧

芽胞并非细菌的繁殖形式。

芽胞的作用：抵抗力强、杀死细菌的芽胞是作为判断灭菌效果的指标（最可靠方法是高压蒸汽灭菌法）、外源性感染的重要来源。

细菌的生理

一、细菌的化学组成

基本化学组成：水、无机盐、糖、脂质、蛋白质、核酸。

特有：肽聚糖、胞壁酸、磷壁酸、D型氨基酸、DAP、吡啶二羧酸（芽胞）

二、细菌的物理性状

1、光学性质：半透明体，细菌悬液呈浑浊状态。比浊法——估计细菌数量

2、表面积和体积比大

3、中性、弱碱性带负电

4、细胞壁、细胞膜都具有半透性。

5、G+渗透压＞G-渗透压

三、细菌的营养物质：水、无机盐、碳源、氮源、生长因子

四、细菌的代谢

l  分解代谢

细菌的生化反应试验：鉴别

1、糖发酵试验：肠道致病杆菌不能分解乳糖，以此鉴别大肠埃希菌、伤寒沙门菌，而且前者产酸产气，后者只产酸不产气。

2、吲哚试验：大肠埃希菌、霍乱弧菌分解色氨酸为吲哚——红色——吲哚试验阳性

3、甲基红试验：甲基红试剂红色——阳性

4、VP试验

5、枸橼酸盐利用试验

6、硫化氢试验

7、尿素酶试验

吲哚试验、甲基红试验、VP试验、枸橼酸盐利用试验用于鉴定肠道杆菌，合成IMViC试验。

大肠埃希菌结果是++--

产气肠杆菌结果是--++

l  合成代谢：一质五素

1、热原质：G-的LPS，耐高温，高压蒸汽灭菌法无效，250℃干烤可破坏，蒸馏法效果最好。

2、毒素与侵袭酶：G+的外毒素的毒性＞G-的内毒素（LPS）

侵袭酶有产气荚膜梭菌的α-毒素（卵磷脂酶）、链球菌的透明质酸酶

3、色素：细菌色素不能进行光合作用

4、维生素：大肠埃希菌可合成维生素B、K。

5、抗生素：多是放线菌、真菌合成。细菌只有多粘菌素、枯菌肽。

6、细菌素：仅杀伤有亲缘关系的细菌，如大肠埃希菌的大肠菌素（Col质粒），可用于细菌分型、流行病调查。

五、细菌合成的蛋白质，大多数G+直接将其分泌到胞外，G-、分枝杆菌经蛋白质分泌系统将其分泌至胞外。

六、影响细菌生长的环境因素

1、充足的营养物质

2、PH

3、温度

4、气体

①专性需氧：结核分枝杆菌、奈瑟菌、布鲁菌

②专性厌氧：破伤风梭菌

③微需氧：幽门螺杆菌

④兼性厌氧菌：多数细菌

5、渗透压：霍乱弧菌无盐；副溶血性弧菌高盐

七、细菌的生长、繁殖

1、二分裂

2、细菌的群体生长可分为4期。

迟缓期

对数期：最适宜研究细菌的生物学性状

稳定期

衰亡期

八、细菌的人工培养及生长状况

l  单个细菌分裂繁殖形成一堆肉眼可见的细菌集团称菌落。

分S型（光滑型）、R型（粗糙型）、M型（黏液型，肺炎克雷伯菌）

琼脂仅赋形作用。

液体培养基——增菌（必须接种纯种细菌）

固体培养基——分离、纯化

半固体培养基——观察细菌的动力和短期保存细菌

选择培养基：SS平板，胆盐抑制G+，枸橼酸钠和煌绿抑制大肠埃希菌，故分离出志贺菌、沙门菌。

l  液体培养基的生长 情况：大多数细菌是浑浊状态；少数链状细菌是沉淀；结核分枝杆菌等专性需氧菌呈表面生长，形成菌膜。

细菌的遗传与变异

一、细菌遗传相关物质——细菌染色质、质粒、噬菌体、转座子

细菌的基因组包括细菌染色质和染色质外遗传物质携带的基因的总称。

1、细菌染色体

环状双链DNA

除rRNA是多拷贝，绝大多数基因是单拷贝，无内含子。

2、质粒

细菌染色体外的遗传物质，双链闭合环状DNA，存在于细胞质中，可以自主复制，携带某些遗传信息，赋予细菌某些遗传性状。不是细菌生长必需，可以丢失。

分类：

①接合质粒（较大，F质粒、R质粒）、非接合质粒（一般较小，但志贺菌毒力质粒大）

质粒的不相容性：同种或亲缘关系近的质粒不能稳定共存于同一细菌——分类，用于流行病学调查

②F质粒（性菌毛）、R质粒（耐药性）、Col质粒（大肠菌素）、Vi质粒（毒力相关）

3、噬菌体

感染细菌、真菌、放线菌、螺旋体，可通过细菌滤器，需电子显微镜观察，主要由蛋白质、核酸组成，无独立代谢酶，专性寄生性，严格的宿主特异性。

蝌蚪状，头部（蛋白质外壳包绕核酸）、尾部（蛋白质，吸附宿主）

Ø  噬菌体感染细菌的结果

①噬菌体增殖，细菌裂解，进入溶菌周期——毒性噬菌体

②噬菌体核酸与细菌染色体整合，细菌变成溶原性细菌，进入溶原周期——温和噬菌体、溶原性噬菌体

溶菌周期：早期合成的蛋白是核酸复制需要的酶，晚期合成结构蛋白。

溶原周期：整合细菌染色体的噬菌体基因组DNA称前噬菌体（遗传至子代细菌），带有前噬菌体的细菌称溶原性细菌。

温和噬菌体有溶原周期、溶菌周期；毒性噬菌体只有溶菌周期。

Ø  溶原性转换：前噬菌体带着遗传性状，使溶原性细菌的性状发生改变。

典型——β棒状杆菌噬菌体感染不产毒素的白喉棒状杆菌后，发生溶原性转换，变成产白喉毒素的白喉棒状杆菌。

溶血性链球菌产红疹毒素（致热外毒素、猩红毒素）

肉毒梭菌产肉毒毒素

沙门菌的特异O抗原

4、转座子——DNA序列

能在质粒之间、质粒与染色体之间自行移动

赋予性状或干扰基因表达

真、原核均有。

 

卡介苗(BCG)：将有毒力的牛型结核分枝杆菌在含胆汁、甘油和马铃薯的培养基上经13年传230代，获得毒力减弱而保留免疫原性的变异株，用于结核病的预防。

二、基因转移与重组方式的种类、定义※

大多数突变发生在另一位点——抑制突变、抵消

定义：

基因转移：供体菌DNA转移给受体菌

基因重组：进入受体菌的外源DNA能够复制，导致受体菌基因型发生改变成为重组菌

方式：

1、转化：感受态细胞直接摄取游离DNA

肺炎链球菌S、R型的转化

2、转导：借助噬菌体

仅发生在同种细菌。

3、接合：经性菌毛。

并非F质粒直接转移至F-，而是F+、F-均由母链新合成F质粒，结果是两个细菌都产生一个F质粒，F-变为F+，也长出性菌毛。

²  R质粒也可以接合传递（同种或不同种传递）。R质粒包括耐药性传递因子（编码性菌毛，接合）、耐药决定子（多种耐药性）

4、溶原性转换：整合有前噬菌体

5、原生质体融合：聚乙二醇

病毒的基本性状

能通过细菌滤器，电子显微镜

无细胞结构，只有一种核酸（DNA或RNA）

严格胞内寄生性，复制

对抗生素不敏感，对干扰素敏感。

一、病毒的形态、结构、化学组成

具有一定形态结构和感染性的完整病毒颗粒称病毒体。

1、大小：nm

2、形态：动物病毒——球形

植物病毒——杆状、丝状

噬菌体——蝌蚪状

3、结构、化学组成

  基本结构：核衣壳（核心、衣壳）

无包膜病毒的核衣壳即病毒体。

核心：DNA或RNA

①指导病毒复制

②决定病毒特性

③具有感染性

衣壳：蛋白质

壳粒是衣壳的形态亚单位。

多肽是衣壳的化学亚单位。

①保护病毒核酸

②参与病毒感染

③具有抗原性

  辅助结构

包膜：包绕在核衣壳外的双层膜。主要成分是蛋白质（病毒基因编码）、脂质、多糖（宿主细胞）

有包膜病毒出芽方式释放

有些包膜外有刺突

有包膜病毒对乙醚、氯仿、胆汁敏感。乙醚常用作鉴定病毒有无包膜。

①维护病毒体的完整性

②与宿主细胞膜融合

③具有病毒抗原的特异性

二、病毒的增殖——复制

1、复制周期：吸附、穿入、脱壳、生物合成、装配与释放

2、双链DNA病毒、单链DNA病毒、单正链RNA病毒、单负链RNA病毒、逆转录病毒、嗜肝DNA病毒（HBV，不完全闭合双链DNA，有逆转录）。

3、除痘病毒，DNA病毒均在细胞核内装配

除正粘病毒、逆转录病毒，RNA病毒均在细胞质内装配

4、与病毒增殖异常有关的现象

1）顿挫感染：

病毒在其中不能合成本身的成分

能合成部分或全部病毒成分，但不能装配和释放

2）缺陷病毒：

病毒基因组不完整或基因发生改变不能正常增殖

辅助病毒存在时，缺陷病毒能正常增殖。如腺病毒伴随病毒是缺陷病毒，当腺病毒（辅助病毒）存在时才能产生成熟病毒。HDV依赖HBV。

缺陷病毒虽不能复制，但对同种成熟病毒感染细胞有干扰作用，也称缺陷干扰颗粒（DIP）。

3）干扰现象：

两种病毒感染同一细胞，一种病毒会抑制另一病毒增殖。上述病毒同种或异种均可以。

三、理化性质对病毒的影响

灭活——感染性丧失仍保留抗原性、红细胞吸附、血凝、细胞融合特性

机制：破坏包膜、蛋白质变性、核酸损伤。

1、物理因素

温度：大多数病毒耐冷不耐热（60℃30min/100℃几秒）但HBV需10℃10min才灭活。有包膜反而不耐热。

酸碱度：PH5~9

射线：紫外线、γ、X

2、化学因素

脂溶剂：流感病毒、乙脑病毒敏感

甲醛制作灭活疫苗

细菌与病毒的致病机制

一、正常菌群

概念：共生，在人体各部位正常寄居而对人无害或有利的细菌。

生理作用：

生物拮抗、营养、免疫、抑癌、抗衰老

二、机会致病菌

概念：当正常菌群与宿主间的生态平衡失调时，原来不致病的正常菌群成为机会致病菌、条件致病菌——机会性感染

条件：

定居部位改变、机体免疫力低下

菌群失调：组成、比例改变，多引起二重感染

三、细菌的致病机制

致病性：细菌引起疾病的能力。与毒力强弱、侵入机体细菌数量多少、入侵部位、机体免疫力。

毒力：表示病原菌致病性的强弱程度，量

半数致死量（LD50）

半数感染量（ID50）：在一定条件下能引起50%实验动物死亡或感染的最小细菌数或毒素量

毒力越强，LD50、ID50越小。

毒力的物质基础是侵袭力、毒素——毒力因子

l  侵袭力：荚膜、黏附素、侵袭素、侵袭酶、细菌生物被膜

1、黏附素：细菌的黏附是感染的第一步，与致病性密切相关。

黏附素分为菌毛黏附素（定值因子，选择性）、非菌毛黏附素

致病机制①激活信号传导系统，释放细胞因子，炎性损伤。②细胞凋亡

2、荚膜、微荚膜：肺炎链球菌、炭疽芽胞杆菌不易被吞噬

3、侵袭酶：金葡菌的凝固酶；链球菌的透明质酸酶、链激酶、链道酶、胶原酶；产气荚膜梭菌的卵磷脂酶。

4、侵袭素：具有侵袭功能的蛋白多肽。

有侵袭能力的细菌有EIEC、福氏志贺菌、鼠伤寒沙门菌、淋球菌。

5、细菌生物被膜

①细菌黏附和附着

②阻挡杀菌物质作用：抗生素、免疫物质

③细菌间信息传递、致病基因转移

④产生耐药性

⑤医院感染

l  毒素——也有一定积极意义

 

外毒素（G+分泌至胞外）

内毒素（G-的LPS，细菌裂解才释放）

化学本质

蛋白质（A+B）

脂多糖

组成

1、A是外毒素活性部分，B是结合亚单位，无毒性但免疫原性强，结合靶细胞特异受体后介导A进入细胞。

2、各亚单位单独均无致病性

3、提纯的结合亚单位可作为疫苗（类毒素-人工主动免疫），刺激人体产生抗毒素（人工被动免疫）

分子量大

O抗原

核心多糖

脂质A（毒性成分）

毒性

毒性强

毒性弱于外毒素

选择性

高度选择性

无选择性

稳定性

理化稳定性差，不耐热。

但葡萄球菌的肠毒素耐受100℃30min

理化稳定性好，160℃2~4h，耐强酸强碱强氧化剂

抗原性

强

弱（不能用甲醛脱毒成为类毒素）

种类

繁多

神经毒素

细胞毒素：抑制蛋白质合成（白喉毒素）、破坏细胞膜（α毒素、卵磷脂酶）

肠毒素

生物学效应：

①发热：LPS激活巨噬细胞产生IL1、6和TNF-α（内生致热原），后者作用于体温调节中枢，调定点升高。

②白细胞数量先减后增。伤寒沙门菌白细胞始终减少。

③内毒素血症、内毒素性休克

④Shwartzman现象、DIC

四、细菌引起的感染类型

不感染：细菌被消灭

隐性感染：发生感染，但损害轻。能抵御同种细菌的再次感染

潜伏感染：平衡

显性感染：急性、慢性；局部、全身

毒血症：血中无菌，有外毒素

菌血症：血中有菌，但不在血中生长繁殖

败血症：细菌在血中大量繁殖并产生毒素，全身中毒症状

脓毒血症： 化脓菌的败血症

内毒素血症：小儿急性中毒性细菌性疟疾

带菌状态

五、病毒的传播途径、侵入方式

病毒引起人机体感染和疾病的能力——病毒的致病作用：细胞、宿主

1、侵入方式

2、传播途径

3、体内传播

局部感染/表面感染：病毒侵入机体后，只在入侵部位感染细胞、增殖并产生病变（局限于同一组织、器官）

全身感染：病毒从入侵部位经血流或神经系统向全身或到达远离入侵部位播散

病毒传播不经过组织间隙

六、病毒感染的类型

隐性感染：占绝大多数，在宿主细胞内增殖但不引起临床症状。

显性感染

 急性感染：潜伏期短、发病急，数日或数周恢复。病原消灭型感染

 持续感染：

  慢性感染：HBV

  潜伏感染：单纯疱疹病毒

  慢发病毒感染：HIV——AIDS   麻疹病毒——亚急性硬化性全脑炎

七、病毒的致病机制

  细胞

1、溶细胞型感染/病毒的杀细胞效应：见于无包膜、杀伤性强的病毒，急性感染。

细胞病变效应CPE：病毒感染、复制时导致细胞器损伤，包括核、内质网、线粒体，使细胞浑浊、肿胀、团缩。

体外培养可见致细胞病变效应：体外培养时病毒感染的细胞可见到变圆、聚集、融合、断裂脱落等现象。

2、稳定状态感染：缓慢、病变轻，但最终也会导致细胞裂解死亡。

3、细胞凋亡

4、病毒基因组的整合

5、细胞的增殖与转化

6、包涵体的形成

抗感染免疫

体液免疫——抗胞外感染、中和毒素

细胞免疫——抗病毒、胞内菌、真菌感染

二、干扰素

 

诱生剂：病毒及其细胞内繁殖的微生物、细菌内毒素、原虫及人工合成的双链RNA

机制：干扰素不能直接杀灭病毒，而是通过与邻近细胞表面的受体结合，促使其合成多种抗病毒蛋白，由后者发挥抗病毒作用。

①2‘-5’A合成酶途径：切断病毒mRNA

②PKR途径：磷酸化eIF-2α，抑制蛋白质合成。

抗病毒特点：抗病毒作用广谱，但不直接杀灭病毒。有种属特异性，但无病毒特异性。

 

 

不完全吞噬：胞内寄生菌，如结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、布鲁菌、伤寒沙门菌

 

黏膜免疫系统的作用—sIgA—防御黏膜感染

 

消毒、灭菌与生物安全

一、几个概念

1、灭菌：杀灭物体上所有微生物的方法，包括杀灭病原微生物、非病原微生物、细菌芽胞。

凡进入机体内部的器具均要灭菌。

2、消毒：杀灭物体上病原微生物的方法，不一定能杀死芽胞、非病原微生物。

3、抑菌：可逆性抑制细菌生长繁殖，但不直接杀灭细菌。

4、无菌：不含活菌，是灭菌的结果。无菌操作。

二、物理消毒灭菌法

  热力灭菌法：干热灭菌法、湿热灭菌法（灭菌效力更大）

干热灭菌法：芽胞160~170℃2h杀灭

1、焚烧：废弃物品、动物尸体

2、灼烧：金属器械、玻璃试管口和瓶口

3、干烤：可杀灭芽胞在内的所有微生物。耐高温的玻璃器皿、瓷器、玻璃注射器

4、红外线：1~10um热效应最强，仅表面，不能均匀。医疗器械、碗筷。

湿热灭菌法：

1、巴氏消毒法：乳制品、酒精消毒

2、煮沸法、流通蒸汽法均不能杀灭芽胞

3、间歇蒸汽灭菌法：可杀灭芽胞。重复3次以上，每次间歇是将要灭菌的物体放至37℃温箱过夜——将所有芽胞发育成繁殖体。不耐高热的含糖、牛奶培养基。

4、高压蒸汽灭菌法：可杀灭芽胞。灭菌效果最好、应用最广。121.3℃15~20min   103.4（1.05）

普通培养基、生理盐水、手术器械、玻璃容器、注射器、敷料——适用于耐高热、不怕潮湿的物品。

  辐射杀菌法

1、紫外线：250~270波长最强；TT二聚体。只适于空气、物体表面消毒。对人有损伤。

2、电离辐射：一次性医疗塑料

3、微波：不能用于金属。必须要有水。

  滤过除菌法

机械阻留去除液体或气体的细菌、真菌，而不能除去病毒、支原体、L型细菌。

不耐热的血清、抗毒素、抗生素、药液除菌。

Ø  75%乙醇灭菌效果最好

一类、二类病原微生物危害大

Ⅳ级实验室防护水平最高

细菌和病毒的耐药性

选择毒性：药物对微生物有毒而对人体无毒（人体相对耐受）

一、抗菌药物种类及作用机制

1、种类：

杀菌药（青霉素类、氨基苷类）、抑菌药（四环素类、磺胺，依赖于巨噬细胞、NK细胞）

广谱（四环素类）、窄谱

2、抗菌作用机制：

抑制细胞壁、细胞膜、蛋白质、核酸

抑制细胞壁

青霉素类、头孢霉素类（β-内酰胺类）、万古霉素、环丝氨酸、杆菌肽

抑制蛋白质——50S亚基

氯霉素、红霉素（大环内酯类）、林可霉素

抑制蛋白质——30S亚基

链霉素（氨基苷类）、四环素

抑制细胞膜

多黏菌素（杀灭G-）

抑制DNA

喹诺酮类（干扰解旋酶，抑制核酸转录）

抑制RNA

利福平（抑制DNA依赖的RNApol）

干扰叶酸代谢

磺胺

二、细菌的耐药性——机制

细菌耐药的控制：①联合用药（无交叉耐药）②维持高浓度③避免滥用

 

 

HIV的鸡尾酒疗法（蛋白酶抑制剂、逆转录酶抑制剂）

细菌与病毒感染的病原学检查法

一、标本的采集和送检——微生物学检查的第一步

原则：

1、采集标本时应无菌操作，尽量避免污染。

2、应在感染部位或病变明显部位采集标本

3、根据病原体在不同时期的体内分布和排出部位选择性采集适宜标本

肠热症：第一周采血、第二周采粪、第三周采尿，全程采骨髓液

病毒培养、抗原检测——急性期标本，采集越早越好

4、怀疑细菌感染，应在使用抗生素前采集

病毒采集时可使用抗生素：避免细菌污染

5、及时送检：4℃，时间过长（加入甘油、二甲基亚砜）-70℃

血清标本-20℃

二、细菌的微生物学检查法

  细菌学诊断

1、形态学检查

细菌染色方法：

1）革兰氏染色法：紫染——碘染——酒精——红染

G+深紫色    G-红色

2）抗酸染色：分枝杆菌  红染——酒精——蓝染

3）特殊染色：鞭毛、荚膜（墨汁负染）、芽胞、异染颗粒

4）不染色标本：活菌动力检测——“滴“

2、分离培养——以获得单个菌落

3、生化试验

4、动物实验

5、细菌毒素

外毒素：Elek平板测定白喉棒状杆菌是否产生白喉毒素

内毒素：鲎试验

6、药物敏感试验

1）纸片扩散法：抑菌环的大小与病原菌对各种抗生素的敏感程度成正比。

2）稀释法：倍比稀释

E-test结合稀释法、扩散法

  病原体成分检测（抗原）

已知抗体检测未知抗原——适用于难以分离培养的细菌

  病原菌相关抗体检测

适用于病程比较长和抗原性比较强的病原体。

用已知抗原检测相应的特异性抗体，作为病原菌感染的辅助诊断

急性期和恢复期双份血清，恢复期IgG效价升高≥4倍有诊断价值；高效价IgM提示近期感染

三、病毒的微生物学检查法

1、分离培养与鉴定

  分离培养

动物接种（多用于病毒研究）、鸡胚培养（流感病毒）、组织细胞培养（①原代细胞：不能传代，研究②二倍体细胞：基本保持正常细胞的核型、表型，传10~    50代，制备疫苗③传代细胞系：永生化，最常用，不能用于疫苗生产）

  鉴定：病毒在细胞中增殖的鉴定指标

1）细胞病变效应CPE：

2）红细胞吸附：

有些包膜病毒有血凝素HA，在感染细胞膜上也表达HA并结合红细胞——检测正粘病毒（流感病毒）的间接指标

3）病毒干扰作用：不产生明显病变，但可干扰感染同一细胞的另一病毒的正常增殖

风疹病毒抑制埃可病毒11型增殖

4）中和试验：用已知抗病毒血清预先混合病毒悬液，再接种于敏感细胞，观察CPE是否消失，若消失说明血清有效。

2、空斑形成实验——数量

50%组织细胞感染量TCID50——感染性和毒力的指标

细菌与病毒感染的预防原则

——管理传染源、切断传播途径、提高人群免疫力（使机体获得适应性免疫力——最重要）

输注活化淋巴细胞也属于人工被动免疫

人工主动免疫：免疫力出现缓慢，维持时间长——传染病的特异性预防

人工被动免疫：立即出现免疫力，但维持时间短——传染病的紧急预防或治疗

1、减毒活疫苗：人工培养获得病原体的毒力下降或由自然界直接筛选出弱毒或无毒但仍保留免疫原性且遗传性稳定的活菌制成。

BCG——人工筛选

鼠疫疫苗——自然选择

2、灭活疫苗：病原菌经大量培养后，用物理或化学方法杀死而制成。

伤寒、百日咳、霍乱、流脑

死疫苗不能诱导CTL，但可以引起迟发型超敏反应。

3、类毒素：细菌的外毒素经0.4%甲醛处理后，其毒性消失而保留其免疫原性的生物制品

百-白-破三联疫苗

Ø 百日咳死疫苗

Ø 白喉类毒素

Ø 破伤风类毒素

4、抗毒素：注射类毒素产生——抗体

用于外毒素所致疾病治疗和紧急预防

破伤风抗毒素、白喉抗毒素

5、计划免疫的疫苗

见课本，熟知几个即可

6、医院感染：住院期间发生的感染和在医院获得但出院后发生的感染。

不包括入院后延伸的原发感染和入院前已感染但出于潜伏期

一切在医院活动的人群