新品 | TOPO克隆试剂盒：一种快速高效的克隆方法

分子克隆是最常见的分子生物学技术之一，也是现代生物技术的基础。随着技术的发展，目前分子克隆已经发展出了多种技术方法，以满足不同的应用需求。

其中，TOPO克隆是一种非常简单高效的克隆技术，能够2-5min内快速完成插入片段和载体的连接反应，操作简单，连接效率极高，克隆阳性率接近100%。

TOPO克隆技术的关键是DNA拓扑异构酶I，DNA拓扑异构酶I是由美国科学家StewartShuman在1990年从牛痘病毒中发现的，同时具有限制性内切酶活性和连接酶活性，它的生物学功能是在DNA复制过程中切断并重新连接DNA。

牛痘病毒DNA拓扑异构酶I特异性地识别5’-(C/T)CCTT-3’序列，并与3'-T的磷酸基团形成共价键。在TOPO克隆中，TOPO载体被线性化，并在每个3'磷酸基团上连接了拓扑异构酶I，当遇到了有5‘羟基的插入片段（PCR产物）时，插入片段的5'端羟基会攻击磷酸基团，并释放能量。利用该能量，插入片段5'端羟基与载体片段3'端磷酸基团连接在一起，Topo异构酶从载体分子上脱落，完成连接反应（图1）.

TOPO克隆的原理（图1）

和TOPO克隆类似，T载体克隆同样能够将目的片段进行快速插入，但是相比于TOPO克隆，T载体克隆的方式有以下几个缺点。

1.TOPO克隆既可以用于平末端也可以用于带A尾的PCR产物，而T载体克隆只能连接带A尾的PCR产物。

2.用T载体进行TA克隆的时候，通常需要将PCR反应产物进行纯化后才能进行连接反应，而TOPO克隆可以直接对未经纯化的PCR产物进行克隆，操作更加方便。

3.T载体克隆一般是12-16℃进行过夜连接，反应时间偏长，而TOPO克隆只需要在室温（25℃）反应5 min即可。

TOPO克隆的应用场景非常广泛,下面列举两种最为常见的应用：

1.在需要进行长片段或者一些复杂模板的载体构建的时候，可以先将插入片段亚克隆至TOPO载体上，将插入片段进行稳定的保存，方便进行后续的分子操作。

2.需要对目的DNA片段进行一代测序时，也可以将目的DNA片段克隆至TOPO载体上，然后将插入有目的DNA片段的TOPO载体质粒送去测序，相对于PCR产物直接测序，送质粒测序结果更加准确，能够测到序列更加完整。

RK30130--ABclonal Zero TOPO-TA/Blunt Cloning Kit是一款适合进行TOPO克隆实验的试剂盒，本试剂盒载体含有自杀基因，只有当载体与插入片段连接成功，宿主细胞才能正常生长，从而实现零背景。

另外这款TOPO克隆试剂盒既能兼容带A尾克隆，也能兼容平末端克隆，通用性非常好，同时TOPO载体很小，能够容纳更长的插入片段，最长可连接10kb。