免疫性脑脊髓炎动物模型【北京动物实验外包】

免疫性脑脊髓炎动物模型【北京动物实验外包】

免疫性脑脊髓炎动物模型主要用于人类多发性硬化症(multiple sclerosis，MS）的研究。

MS是一种在西方国家发病率很高的自身免疫性疾病。实验性自身免疫性脑脊髓炎(exper imental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的病理变化与发病机制与急性MS极其相似。因此，实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)为目前国际公认的MS动物模型。成功的建立EAE模型对MS的研究有很重要的作用。

（一）自发性及转基因动物模型

近年来人们发现小鼠更易通过杂交系或利用基因敲除技术制作具有特殊遗传基因背景的品系，用于MS/EAE免疫训节机制障碍的研究。例如，肿瘤坏死因子-a(TNF-a)受体基因缺陷小鼠较同系野生型小鼠 EAE模型脱髓鞘和轴索损伤程度轻，说明TNF-a是介导脱髓鞘和轴索损伤的重要细胞因子；又如MHCI类基因缺陷的C57BL/6 基因敲除小鼠，用寡树突胶质细胞糖蛋白(MOG）或含脂质蛋白(proteolipid protein,PLP）不能诱发 EAE，这可能是由于其不具有同系野生型小鼠处理和提呈这些髓鞘抗原的能力。

（二）诱发性动物模型

EAE模型按临床病程通常分为4型：

1.急性单相(AM)型 常用髓鞘素抗原如髓鞘素碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)、含脂质蛋白(PLP)免疫 Lewis 大鼠，或用寡树突胶质细胞糖蛋白(MOG)35-55 多肽片段免疫B6小鼠，也可通过MBP或其多肽片段致敏的T淋巴细胞系被动转输给正常大鼠诱发，病程短，以急性脑脊髓炎病变为主，脱髓鞘较轻，可完全恢复。

2.复发缓解(RR）型 一般为双相病程（发病2次），可以自愈，用PLP免疫SJL小鼠是理想的RR型模型。

3.迁延复发(PR）型 也称慢性复发(CR）型，病情较重，死亡率较前两型高；RR与PR型不易诱发，常需一定品系动物如Lewis大鼠的某些亚系、DA大鼠或某些特殊基因背景的小鼠，并用特定的免疫原如MOG35-55多肽片段，有时需增加其他诱导方法，如转输CD4+T细胞，注射抗髓鞘成分特异性抗体或致脑炎因子白细胞介素12等，此两型EAE脱髓鞘及轴索损伤明显，临床表现与MS颇近似。

4.慢性进展(CP）型

【造模机制】用豚鼠脊髓匀浆(guinea pig spinal cord homogenate,GPSCH）作为实验性变态反应性脑脊髓炎的抗原。等体积的GPSCH 和完全弗氏佐剂(complete freund's ad-juvant,CFA)混合后致敏动物，即可造成Wistar大鼠 EAE模型。

【造模方法】

1.动物选择 根据动物对EAE的敏感性，制备模型主要选用的动物有C3H/HeJ,SJI/J,B10PL,PL/J小鼠，Hartley,Stisin13豚鼠及新西兰白兔等。由于实验研究的需要，大鼠 EAE模型的应用越来越多，目前报道较多的大鼠模型所用大鼠品系主要为对 EAE敏感的 Lewis 大鼠。国内目前诱发大鼠 EAE模型的常用免疫原为自提取的DA大鼠脊髓匀浆(DA-SCH)或异种脑、脊髓匀浆，所用动物大多为 Lewis 大鼠、Wistar 大鼠或豚鼠。Wist-ar大鼠一直被认为对 EAE诱导具有抵抗性(EAE-resistant)。近年来，成功地诱导了 Wist-ar大鼠急性及复发性 EAE，推动了多发性硬化的动物实验研究。国外越来越多的研究者应用不同的MOG 肽段或 DA-SCH为免疫原诱发缓解-复发型模型，以更好模拟人类MS的发病过程。其中 MOG35-55及DA-SCH浆组为缓解-复发型，更接近于人类 MS的发病过程，具有更广的应用前景。仪器药品：显微镜、完全弗氏佐剂、不完全弗氏佐剂、百日咳疫苗（BPV）等。

2.模型制作 取豚鼠2只，麻醉后经心灌注生理盐水至冲出液为无色，迅速取出脊髓去除脊膜，称重后放入组织研磨器，加入等量生理盐水研磨成50%的豚鼠脊髓匀浆(GP-SCH）。将等体积的GPSCH和完全弗氏佐剂(CFA）混合，用注射器在冰上抽打，直至成为油包水乳剂，此即免疫抗原。以上过程均注意无菌操作。抗原不宜保存，应立即使用。30只Wistar大鼠随机平均分为3组：一次免疫组（A组），二次免疫组(B组)和生理盐水对照组（C组）。其中A,B两组大鼠用免疫抗原，0.4ml/只，C组给生理盐水+等量CFA,.0.4m1l/只。给药方式均为背部皮下注射，分为4点，每点 0.1ml。最后每组动物均在右足脚背皮内注射 O.1ml百日咳疫苗(BPV）(约含2×100个菌体）。接种抗原后第15天，将等体积的GPSCH 和不完全弗氏佐剂(incomplete Freund's adjuvant,IFA)混合成油包水乳剂，用同样方法给B组注射。

3.观察指标 每天观察动物的饮食、活动情况及体重。EAE评分采用如下标准。0分：动物无任何症状；1分：动物尾部无力或步态轻度笨拙；2分：动物尾部无力十后肢无力，人为将鼠翻倒后能够复位；3分：肢体完全瘫痪，人为翻倒后不能复位；4分：濒死状态或死亡。A,B两组动物于各自发病高峰期，C组动物于实验后2周，全部处死，常规甲醛 PBS溶液经心全身灌注固定，取出大脑，再浸泡固定1天，作冷冻切片(厚5μl)。常规HE染色，光镜下观察。

【模型特点】复制模型表现为，少食消瘦、委靡发烧、肢体瘫痪、尿便障碍、重则抽搐死亡。病理观察可见，脑脊髓表静脉充盈。脑和脊髓弥漫性水肿。脑脊髓膜充血，脊髓各段小血管周围有大量单核、淋巴细胞浸润，形成典型的“血管套”。血管内膜增厚，管腔变小，炎症细胞浸润，部分有神经胶质增生，Weils髓鞘染色，脑内髓鞘断裂和崩解，严重的有广泛的神经髓鞘变性、脱失，但轴突相对完整，以脑干和脊髓等为著，其中大多局限在炎症改变明显的血管套周围的白质区。

【注意事项】

1.应根据实际情况选择易感动物造模 并注意动物的类型、品系、年龄、性别。

2.注意所用的抗原纯度、类型、计量、物理形态和注射方法会影响实验结果。

3.应用同一批次的佐剂及其他试剂。

【应用范围】该模型是神经系统疾病研究的一个十分有用的模型。主要用于研究人类多发性硬化症的发病机制及药物治疗效果等。

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