肾毒性慢性肾衰竭动物模型【实验代做】

肾毒性慢性肾衰竭动物模型【实验代做】

【造模机制】腺嘌呤通过黄嘌呤氧化酶的作用生成 2,8—二羟基腺嘌呤,后者沉积于肾小球与肾间质部位,形成异物肉芽肿性炎症,并堵塞肾小管腔引起相应的肾小管腔囊状扩张。随病程进展,肾单位大量丧失导致肾衰竭。

【选模方法】

1.动物和仪器、试剂:选用雄性 Wistar 大鼠 20 只,体重(200±30)g,用普通饲料饲养1 周后,随机分为两组,每组 10 只;空白对照组,大鼠腺嘌呤 CRF 模型组。腺嘌呤;LDZ4-0.8 型离心机, Mon-arch 1000 型生化分析仪;半自动血液分析仪(F820)。

2.模型制备 将腺嘌呤 1g 溶于 40ml 生理盐水中制成混悬液,浓度为 2.5%,按200mg/(kg ·d)剂量,每日定时给大鼠灌胃给药,连续 24 天,自由摄取普通饲料、饮水。空白对照组大鼠灌服自来水 0.8ml/100g。

3.样本采集和指标测定 每 1 周称体重 1 次,放入代谢笼中测 1 次 24 小时尿量,实验周期 24 天。第 23 天晚撤掉饲料饥饿 12 小时,第 24 天晨给药 1 小时后断头采血 5ml,取2ml 血作红细胞记数(RBC),血红蛋白定量(HGB)、红细胞压积(HCT)的测定。剩余血液以 4000r/min,离心 10 分钟,分离血清测 Ca2t、pt、BUN.Ser 含量。并迅速取一部分肾组织,10%甲醛(体积百分比)固定,石蜡包埋,切片,HE 染色,做光镜病理组织学检查并摄片。实验数据以Z士5 表示,采用两样本t检验,应用 SPSS11.0 统计软件分析。

【模型特点】

1.肾衰竭表现典型有明显体征模型组大鼠随给腺嘌呤天数的增加而日渐消瘦,畏寒肢冷、蜷缩弓背、精神委靡、体毛脱落、便溏水肿、肾脏呈“大白肾”等,模型出现 RBC,HGB、HCT 降低,BUN.Scr 升高,低钙高磷,慢性肾衰竭主要生化改变。

2.肾小管病理学改变明显腺嘌呤诱导的 CRF 模型发生涉及肾小管堵塞,病理改变主要为肾小管损害。肾脏明显增大,两肾呈灰白色,表面颗粒状,肾包膜与肾实质粘连不易剥离,切面皮髓质分界不清。光镜检查:肾小球数量减少,平均每个低倍视野 2~4个(正常6~8 个),呈萎缩状,形态基本正常。肾小管囊状扩张,肾皮质广泛结晶沉积,结晶周围可见异物巨细胞反应,大量肾小管破坏,萎缩消失。有炎症细胞浸润,间质纤维化明显。

【应用范围】研究慢性肾衰竭发病机制和治疗方法。中药新药的药效学研究,特别对有温肾功能的抗肾衰新药的研究。

【注意事项】

1.按体重灌胃给药每个动物尽可能获得同等程度的损伤,使 CRF 动物模型易于标准化,优于传统的与饲料混合给药法。

2.根据研究目的需要选择给药剂量,可根据腺嘌呤剂量的大小和喂养时间的长短制成轻、中、重度肾衰竭模型。

【模型评估】大鼠腺嘌呤 CRF 模型方法简便可控,可根据腺嘌呤剂量的大小和喂养时间的长短制作成轻、中、重度的肾衰竭模型,病程稳定,适宜长期给药,成功率高,易于推广应用。病理学观察表明,此模型以肾小管破坏为主要特征,具有恢复肾小管功能的新药用此模型易出现阳性结果。据报道,此模型还能使动物基础体温降低,血 Ts、T、浓度降低,睾丸组织萎缩,精子减少,近年来多作为“肾阳虚”模型使用,所以具有温肾功能的抗肾衰新药用此模型更为适合。

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