ELISA 的类型（直接、间接、夹心ELISA）

直接ELISA

在直接 ELISA 中，抗原或样品直接固定在板上，偶联的检测抗体与靶蛋白结合。 然后加入底物，产生与样品中分析物量成正比的信号。 由于在直接 ELISA 中仅使用一种抗体，因此它们的特异性低于夹心 ELISA。

图1.直接ELISA

在这种形式的 ELISA 中，酶联（偶联）抗体也对所寻找的抗原具有特异性。 当添加到孔中时，它会与抗原（如果存在）结合。 在酶联抗体与抗原反应一段时间后，清洗孔以去除任何未结合的酶联抗体（加入底物时会产生假阳性）。 添加底物后，颜色变化是底物酶促转化为其产物的证据，表明存在抗原。

间接ELISA

间接 ELISA 与直接 ELISA 的相似之处在于抗原固定在板上，但它包括额外的扩增检测步骤。 首先，添加未偶联的检测一抗并与特定抗原结合。 然后添加针对一抗宿主物种的偶联二抗。 然后底物产生与孔中结合的抗原量成比例的信号。 与直接 ELISA 一样，未结合的酶联抗体被洗掉以防止假阳性结果。 加入酶底物，颜色变化表明试验呈阳性。

图2.间接ELISA

夹心 ELISA 

夹心 ELISA 是最常见的 ELISA 类型。 两种特异性抗体用于将抗原夹在中间，通常称为匹配抗体对。 捕获抗体包被在微孔板上，加入样品，感兴趣的蛋白质结合并固定在板上。 然后添加偶联检测抗体并结合靶蛋白上的额外表位。 添加底物并产生与样品中存在的分析物量成比例的信号。 夹心 ELISA 具有高度特异性，因为需要两种抗体才能与感兴趣的蛋白质结合。

图3.夹心ELISA