A33/CD9/CD81/CD63/PDL1/单链aCD11c抗体修饰外泌体的制备

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A33抗体修饰外泌体的制备方法：

通过化学交联法将A33抗体与羧基化的超顺磁性纳米粒(USPIO)连接制备探针(A33-USPIO),并利用动态光散射和红外光谱法对连接前后的USPIO进行表征。采用超速离心法分离出人结肠癌细胞株LIM1215细胞来源的EXO包载DOX ,并通过透射电镜观察形态。

用ELISA法测定EXO和探针结合的最适比例。透析法测定A33抗体修饰的载DOX的 EXO给药系统(A33-US-EXO/DOX)体外释放特性。将不同的DOX制剂分别与LIM1215共培养后,用流式细胞仪测定细胞摄取DOX的情况,利用荧光显微镜验证A33-US-EXO/DOX的体外靶向能力。

透射电镜下EXO直径约为100 mm , 2.5 ug 探针约能与32 1g 的EXO结合,结合后平均粒径为(187.83士6.76 ) nm ,聚合物分散指数( polymer dispersity index ,PDI)为0.21。在 pH 7.4,6.0、5.0条件下,DOX组、EXO/DOX组和A33-US-EXO/DOX组的48 h累积释药量分别为.24.32%、 34.07% , 62.82% ,细胞摄取效率分别为(13.10±1.08%、(51 .53士3.56%和(85,11士3.91%/%。荧光观察显示,A33-US-EXO/DOX与A33抗原阳性的LIM1215细胞大量结合,而与A33抗原阴性的RAW264.7细胞结合较少。A33抗原靶向的EXO给药系统,体外实验表明其具有较高的摄取效率和良好的靶向性。

CD63抗体修饰外泌体制备方法：

在streptactin磁珠表面功能化处理修饰CD63抗体,过滤待测细胞培养上清液样本,将过滤后的待测细胞培养上清液样本与CD63抗体偶联磁珠混合并孵育;分离孵育后的混合物,得到磁吸附物和分离液;洗涤磁吸附物,并将洗涤后的磁吸附物与洗脱缓冲液混合并孵育﹐使固液分离,收集外泌体提取液。

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