【snapgene引物设计】一学就好！！ 超用心制作

玉米whirly1蛋白的PET28A融合表达载体

1、WHIRLY1基因CDS序列查找ncbi

ncbi>Nucieotide（外显子基因编码序列）

下拉找到CDS>CDS

atg起始密码子

tga终止密码子

右下角Fasta

酶切位点的选择：

1、两个酶切位点离的越远越好，离得越远，酶切效率越高

2、酶切位点不能在插入序列中有所出现

加粗的是只有一个酶切位点，不加粗的是不止出现一次的酶切位点

把两个酶切位点之间的序列删除掉（保留两边的酶切位点）

两个序列方向不一致，需要把其中一个序列方向倒置（倒置whirly1序列）

全选whirly1序列，新建勾选Reverse complease（反向序列）或者插入序列时勾选Reverse complease（反向序列）

引物包含酶切位点，引物序列一般在18~25bp

终止密码子要去掉

连续融合表达His标签