液相色谱常见问题Q&A 之色谱柱清洗

在做液相色谱过程中，色谱柱的污染在所难免，下图为污染的硅胶颗粒，色谱柱污染常常会导致色谱柱压力升高，基线不稳，峰形变差等一系列问题，那该如何对色谱柱进行有效的清洗呢？

Q:色谱柱污染来源主要有哪些？
A:1. 分析样品的残留带来的污染；
2. 流动相，系统管路带来的杂质污染；
3. 系统磨损带来的颗粒性杂质；

Q:色谱柱污染有哪些表现形式？如何判断色谱柱是否污染了？
A:1. 接上色谱柱后，仪器压力偏高；
2. 基线出现明显的噪音或者漂移；
3. 峰形出现拖尾、分叉、肩峰等情况；
4. 柱效出现明显降低等Q:

色谱柱污染了该如何冲洗？

A:

1. 如果是常规反相色谱柱，可以首先用5%甲醇（乙腈）水冲洗10倍柱体积，可以将缓冲盐和色谱柱中一些极性化合物冲干净（如果是缓冲盐析出造成的色谱柱堵塞，则需冲洗更长时间，且加上柱温）；然后再用纯甲醇或纯乙腈冲洗10-20倍柱体积，将一些疏水性的杂质冲洗干净（流速可按正常流速进行冲洗，若色谱柱压力太高，可适当减小流速并延长冲洗时间）；如果上述冲洗之后还是没有解决问题，可以选择异丙醇（四氢呋喃）冲洗10-20倍柱体积。

2. 如果是因为生物样品造成的色谱柱污染，则可在清洗流动相中加入0.1%的TFA，以增强对吸附蛋白质的洗脱。

3. 如果是正相色谱柱污染，则可用正己烷，二氯甲烷，异丙醇对色谱柱依次冲洗10倍-20倍柱体积。

4. 另外，建议大家对色谱柱进行反冲，因为色谱柱污染通常都是在柱头的位置，反冲的效果会更好，也能冲洗掉大多数堵塞在筛板上的颗粒物。

5. 如果上述步骤都无法解决污染问题，则可考虑拆开柱头，将筛板取出进行超声清洗，并更换柱头污染的填料。这步操作需在厂家的指导下进行，柱头重新拆装容易对色谱柱柱效和峰形造成影响。

6. 最后提醒大家的是，在冲洗色谱柱之前，大家最好先把仪器管路冲洗干净，以免在冲洗的过程中将仪器系统内的杂质冲到了色谱柱中，增加了新的杂质。