抗酸染色的原理和步骤

抗酸染色的原理和程序：抗酸染色是细菌学中另一种广泛使用的鉴别染色方法。  一些细菌抵抗酸和酒精的脱色，因此它们被称为抗酸生物。 酸-醇（3% HCl 95% 乙醇）是一种非常强效的脱色剂。 这种染色技术将细菌分为两组。 (1) 耐酸和 (2) 非耐酸。 该程序广泛用于结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌的诊断。 某些分枝杆菌和某些诺卡氏菌属的耐酸性与其高脂质含量 (60% w/w) 相关。 由于细胞壁的脂质含量高，抗酸细胞对染料的渗透性相对较低，因此难以染色。 对于这些细菌的染色，使用作为化学增强剂的 5% 苯酚水溶液可促进主要染料的渗透。 还使用热量作为物理增强器。 这些细胞一旦被染色，就很难用酸和酒精脱色。

在抗酸染色中，使用了三种不同的试剂或染色剂。

1. 原染（石炭酸品红）：

石炭酸品红是一种酚类染料，可溶于构成分枝杆菌细胞壁主要部分的类脂物质，可渗透并保留红色染料。 通过施加热量来增加渗透，这会驱动石炭酸品红穿过类脂壁并进入细胞质。 应用初级染色后，所有细胞都呈红色。

2、脱色剂（酸-醇或20%H2SO4）：

涂片在脱色前冷却，使蜡状细胞物质硬化。 在应用脱色剂时，抗酸细胞表现出抗脱色性。 与脱色试剂相比，初级染料更易溶于细胞蜡。 因此，分枝杆菌会保留原色，但对于缺乏细胞蜡的非耐酸细菌而言，情况并非如此。 在脱色过程中很容易去除主要染色剂，观察到非耐酸细胞为无色。

3. 复染（亚甲蓝或孔雀石绿）：

非抗酸细菌吸收复染液并呈现蓝色或绿色，而抗酸细胞则保留原染液的红色。

孢子染色技术用于检测携带孢子的细菌和孢子类型。 孢子不易被原染剂（孔雀石绿）染色。 因此，涂片被加热以染色孢子。 一旦孢子接受了孔雀石绿，就不能用自来水脱色。 营养细胞很容易被自来水脱色并进行复染并呈现红色（番红）。 这种方法是用蒸汽加热代替直接加热的改进方法。 多纳法也用于孢子染色，其中石炭酸品红用作主要染色剂。 将带有染色剂的载玻片加热 5 至 10 分钟后，清洗并进行负染色。

胶囊染色用于检测细胞周围胶囊的存在。 它可以通过使用阳性和阴性染色技术来进行。 由于胶囊的非离子性质，它对染料的亲和力非常低。 在阳性染色中，使用结晶紫对细菌细胞进行染色。 渗透压差异是通过应用硫酸铜 (20%) 溶液产生的，这会导致染色剂向细胞外表面扩散。 在去除硫酸铜溶液并干燥载玻片时，一些染色剂在扩散过程中没有穿过包膜周围。 这种染色保留在囊层中，相对于深紫色细胞呈浅紫色。 胶囊也很容易通过负染色技术证明。 当应用染色溶液时，它会染色细胞，并且在应用苯胺黑背景时被染色，使胶囊无色。