免疫组织化学染色

1. 68℃烘烤45-60 min。

2. 脱蜡至水。

3. 抗原修复：加稀释好的1L EDTA抗原修复液（根据抗体说明书选择EDTA或者柠檬酸盐）到高压锅，2100W煮沸后加入切片，盖上高压锅盖子，功率调制1000W。气阀旋转时/开始喷气开始计时2.5min，高压锅放入水盆中冷却，流水激气阀，打开高压锅的盖子，晾20min至室温。

4. PBS洗，3*5min。

5. 3% H2O2 孵育10min，RT（去除内源性过氧化物酶）。

6. PBS洗，3*5min。

7. 封闭：山羊血清（如需破膜，封闭液重加入0.1%的Triton X-100）或免疫染色封闭液，RT孵育0.5-1.5h（具体的时间需要根据所用试剂的说明书）。

8. 一抗4℃孵育盒重过夜（18h）。

9. RT或37℃复温45min。

10. PBST洗3*5min。

11. 二抗 RT孵育30min。

12. PBST洗3*5min。

13. 稀释好的DAB（1滴加入到1mL DAB稀释液中）孵育30s-3min（加入DAB后马上放在镜下观察，至阳性区域呈现明显的棕色，而背景未着色）。

14. 水洗。

15. 复染：苏木精 30s → 水洗 → 盐酸酒精 2-5s →自来水泛蓝10min → 脱水透明：75%，85%，95%，100%I，100%II →三缸二甲苯各5min。

16. 封片。

上述文字可结合视频： 

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