星戈瑞Sulfo-Cy3 alkyne细胞膜的偶联实验方法

在将Sulfo-Cy3 alkyne与细胞膜偶联的实验中，需要使用点击化学反应，通过炔基与含有Azide官能团的细胞膜分子进行特异性共价结合。以下是一种常用的细胞膜偶联实验方法：

实验步骤：

1. 细胞培养和处理：

   - 选择适当的细胞系进行实验，并在培养皿中培养细胞至合适的密度和状态。

   - 转染细胞（如需要），使细胞表达带有Azide官能团的膜蛋白（例如，膜蛋白表达的GFP-Azide融合蛋白）。

2. Sulfo-Cy3 alkyne的添加：

   - 准备Sulfo-Cy3 alkyne荧光探针的工作溶液。根据实验设计和细胞处理数量来确定适当的浓度。

   - 将Sulfo-Cy3 alkyne溶液加入培养皿中，并充分混合。根据实验要求，可以在细胞培养基中直接加入或通过洗涤细胞的方式加入。

3. 培养和点击反应：

   - 孵育细胞在适当的温度和CO2浓度下，通常为37°C，5% CO2，持续培养一定的时间，例如30分钟至1小时。

   - Sulfo-Cy3 alkyne荧光探针与细胞膜上含有Azide官能团的分子进行点击反应。点击反应需要铜离子催化剂。可以使用点击化学试剂盒，其中包含点击反应所需的配体和催化剂。

4. 细胞处理和成像：

   - 洗涤细胞，去除未反应的探针和剩余的点击反应试剂。

   - 添加适当的细胞培养基，以保持细胞在适宜的条件下进行成像。

   - 使用荧光显微镜或其他适合的荧光成像设备观察细胞样品。Sulfo-Cy3 alkyne在荧光通道中产生红色的荧光信号，可以显示细胞膜偶联的情况。

需要注意的是，点击反应需要一定的时间进行反应，但时间过长可能会引起细胞毒性或损伤。因此，在实验设计中应仔细控制点击反应时间。此外，对于细胞膜的选择性偶联，还应在实验中设置合适的对照组，以确保偶联的特异性和准确性。

CY5 COOH

Sulfo-CY7 tetrazine

CY3 amine

Sulfo-CY3 amine

CY5.5 NHS ester

Sulfo-CY5 COOH

CY7.5 maleimide

Sulfo-CY7 maleimide

SiR-PEG4-DBCO

SiR-PEG4-tetrazine

本篇图文信息均由【星戈瑞stargraydye】小编提供，如需了解详细烦请联系！