如何成功培养仓鼠肺细胞？一位老师分享的心得

细胞培养技术是现代生物学中的基础和重要环节之一，在生物研究、药物筛选和制造等领域中都具有重要作用。仓鼠致力于成为肺细胞培养技术的研究对象，由于仓鼠的体积较小、生长速度快、易于操作，而成为了许多生物学实验室实验的首选。然而，仓鼠肺细胞培养技术也需要一定时间和经验的积累，才能得到高质量的细胞培养。下面是我作为一名生物学教师在教学和实验中总结的一些心得体会，分享给大家如何成功培养仓鼠肺细胞的方法。

一、 准备工作

1.1 培养用品和设备的准备

仓鼠肺细胞培养需要准备培养生物品、培养基、平皿、玻璃移液器、生物安全柜、离心机、CO2培养箱、显微镜等一系列设备和培养用品。

1.2 前期准备

使用培养瓶需要事先进行高压消毒处理；准备足够数量的无菌移液管、离心管、超净工作台；分裂细胞前用PBS清洗和消化细胞。

1.3 坚持操作规范

操作实验室中应该遵守科学的操作规范，保证操作的无菌化和避免可能造成伤害的事故。手套、洗手液、消毒酒精等日常必备品应该保证充足存量，不可挥霍而造成无法控制的污染。

二、 培养基质

2.1 基础培养基的选择

DMEM（Dulbecco的修行的最小是本能培养基），DMEM/F-12、RPMI，这些培养基都可以用于仓鼠肺细胞培养，但不同的培养基会对细胞生长情况有着差异。DMEM/F-12是其中的一种普遍选用的培养基，配制的质量水平的高低非常关键，同时提供稳定的营养，使细胞能够健康生长。

推荐使用培养基和添加剂 RPMI-1640（中乔新舟 货号：ZQ-200）+10%胎牛血清（中乔新舟 货号：ZQ500-A）+1%双抗（中乔新舟 货号：CSP006） 推荐完全培养基货号 ZQ-201

2.2 改进培养基的制备

在基础培养基的基础上，可以根据肺细胞的生长特性和细胞培养的需要，将培养基改进成指定的培养基。添加成分，比如高浓度的FBS，高浓度的青霉素-链霉素可以增加活性因子的含量，使得培养的细胞数量，生长情况更为理想。

三、 培养条件的控制

控制细胞培养过程中的环境因素，以维持细胞的适宜生长。细胞的适宜生长环境包括适宜的温度和二氧化碳含量以及适宜的培养时间间隔等。

3.1 保持适宜的温度和湿度

目前，最为常见的细胞培养环境是37 °C和5% CO2气氛下，同时控制相对湿度在90 ± 5%之间。

3.2 CO2培养箱

CO2培养箱需定期清洁，清洁方法：使用70%的酒精或其他合适的消毒剂擦拭。

3.3 观察培养时间间隔

对于快速增殖的细胞，3-4 days 相当于一代细胞的时间周期，而对于增殖速度慢的细胞来说，时间周期更长。在操作时尽量保留时间记录，更好地把控肺细胞培养的时间，掌握细胞生长的情况。

四、 培养细胞

4.1 防止污染的发生

重复使用的培养习惯可能会导致污染，完全切断材料交叉作用的途径，例如对积液、喷雾、管道、培养瓶口等位置的操作，需要避免接触到舌韧带。毕竟最终目的是待细胞健康生长，将细胞培养至指定定量。

4.2 观察细胞孵化

观察仓鼠肺细胞比较直接的指标是细胞的数量和形态，通过观测细胞的生长期，可以很好地控制肺细胞的生长情况。等级方式评估细胞增殖：通常情况下，如果细胞的涂片密度超过了80%，就需要移动这些细胞.

4.3 在合适的时间进行细胞传代

当细胞在初始培养器中集聚到较高浓度时，就需要移至新的培养器中，并向其中添加新鲜的培养基，供细胞继续生长。传代的间隔时间，同样影响到细胞的养殖效果

五、 维持细胞健康

5.1 预防感染细菌

肺细胞培养时，最容易出现的问题是细菌的污染，因此需要在培养过程中加入抗生素，并进行严格的卫生操作。

5.2 避免细胞自发凋亡和细胞受伤

卫生操作越好，越能让细胞在良好的状态下持续繁殖。同时，避免细胞受伤，减少不必要的宁量移除，是保持肺细胞培养健康的重要条件。

六、 结束实验

6.1 完成实验记录

细胞培养的欣喜和疲惫都是需要用实验日记记录下来的。日记上，除了写实验操作过程的细节，还需要添加图表记录数据和细胞孵化的时间统计表。

6.2 清洁工作区域以及材料

完成实验后，及时清理工作区域，分类清理之后放置到恰当的位置。同时处理好离心管，移液管等所有材料，干净无污染地进行妥善处置。

总之，仓鼠肺细胞培养技术需要完善的实验操作，科学规范的操作能够为我们的实验提高便利性，从而取得更加优异的研究