细胞培养室有支原体污染怎么办？细胞培养如何有效避免支原体污染？

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细胞培养技术是一种体外增殖细胞的常规实验技术，目前被广泛用于教学、科研和临床实验。污染控制是细胞培养能否成功的关键所在。引起培养细胞污染的微生物有细菌、霉菌、黑胶虫、支原体等，其中支原体是常见的污染物。

支原体属于缺乏细胞壁的原核微生物，直径约0． 13 ～ 0． 18 μm，大小介于细菌和病毒之间，可透过一般滤膜( 0． 22 μm) ，因此在细胞培养过程中，细胞极易受到支原体污染。已有许多调查及研究显示，世界范围内正在使用的细胞体系中支原体污染发生率达到30% ～ 60%。支原体是一种介于细菌与病毒之间的一种微小生物，可与细胞共存，是细胞培养较常见的一种污染物。

支原体感染发生后培养液清澈不浑浊，但pH 值变化明显，培养液更换后几小时内变为酸性( 颜色变黄) 。污染初期，显微镜高倍镜下观察发现细胞外形无明显变化但有细小黑色颗粒，所以不容易被发现。虽然支原体可以与细胞长期共存，且随着细胞换液而缓解，但细胞遭受支原体污染后会抑制细胞生长，改变细胞的DNA /RNA 及蛋白表达，使细胞的转染效率大大降低，并在污染后期引起细胞变形，对后续教学、科研产生严重影响。因此在细胞培养过程中进行支原体检测十分必要。

细胞培养工作中，预防支原体污染尤为重要，本实验室长期采用以下几点来控制支原体污染。

( 1) 实验用品无菌处理: 所有用品都要经过高温消毒灭菌; 培养基、血清、胰酶等试剂均要经过检测确定无支原体污染后方可使用。

( 2) 操作者遵守无菌室消毒规定: 由于正常人口腔带有支原体，因此进入无菌室一定要带好口罩、帽子( 口罩必须罩住口鼻，帽子必须将头发全遮在里面) ，鞋套，穿隔离衣，带乳胶手套，并用75% 酒精擦拭手套表面。

( 3) 操作过程严格按照无菌操作要求: 开始要先用75%用精棉球擦拭瓶口，在火焰上烧灼瓶口，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，瓶口要再次转动烧灼; 操作时尽量不要讲话; 要常更换吸管，一旦发现吸管触及手和其他物品应弃去。所有操作过程要在距离超净台边缘10 cm 以内的无菌区域进行。

( 4) 定期进行支原体污染检测: 对实验室中的培养物定期进行支原体检测，预防为主，不能等到发现有支原体污染时再进行检测，发现已经污染支原体的培养物，灭活后弃之，严禁随意倾倒、随意丢弃。及时更换新的培养物，避免支原体污染。

( 5) 保持操作环境清洁: 无菌室的滤膜要定期清洗和更换; 每次进行细胞培养操作前，无菌室和超净台都要用彻底消毒灭菌; 每次实验完毕要用物表杀孢子剂擦拭操作台，避免交叉污染; 定期对二氧化碳培养箱进行消毒灭菌。

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